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目的：体外分离培养人视网膜母细胞瘤肿瘤干细胞（RTSC），建立RTSC的鉴定方法。方法：新鲜Rb组织经酶消化法获取单个瘤细胞，接种于无血清化学限定培养基培养。对培养7-15d的神经样球体，分别进行克隆形成、增殖能力、分化能力等干细胞特性鉴定；采用RT-PCR及免疫荧光等方法对RISC及其分化细胞的特性进行鉴定。结果：Rb肿瘤在无血清培养基中可以形成神经球体样肿瘤球体，后者可以多次传代，具有自我再续能力。RTSC来源的神经球体表达神经干细胞或视网膜早期发育的相关基因Nestin、CD133、Bmi-1、Pa