【摘 要】
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目的 构建靶向过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)载体,转染骨髓基质细
【机 构】
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郑州市,基础医学院生物化学教研室,基础医学院微生物免疫学教研室
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目的 构建靶向过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor-γ,PPARγ)基因的小干涉RNA(small interfering RNA,siRNA)载体,转染骨髓基质细胞(marrow stromal cells,MSCs)后观察其对PPARγmRNA的抑制作用.方法 根据siRNA设计原则,在PPARγmRNA序列中选择2个特异性靶序列(677-695和497-515)及同时设计1条无关对照序列;体外合成对应发卡样DNA片段,经退火后,将其定向克隆入siRNA载体pRNAT-U6.2,将重组siRNA载体pRNAT-U6.2-PPARγ用脂质体包裹转染入MSCs后,采用RT-PCR检测PPARγ基因mRNA表达水平的变化.结果 得到阳性重组克隆pRNAT-U6.2-SPPARγ,经过PCR鉴定与测序,结果正确;RT-PCR检测转染MSCs显示,PPARγ基因的表达水平明显降低.结论 成功构建靶向PPARγ基因的siRNA载体pRNATU6.2-SPPARγ,转染MSCs可以有效抑制PPARγ mRNA的表达,这为预防酒精性股骨头坏死发生的研究奠定了可靠基础.
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