【摘 要】
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目的 构建靶向分化群抗原19（CD19）的嵌合抗原受体（CAR）-NK92细胞，并观察其对相关肿瘤细胞的杀伤作用。方法 用XhoI/NotI限制性内切酶将靶向CD19的单链抗体序列与pMFG逆转录病毒载体进行双酶切，回收纯化片段后用连接酶进行连接，构建CAR001、CAR002质粒，进行NK92细胞的转导和逆转录病毒载体的包装，构建靶向CD19的CAR-NK92细胞，分别为CAR001-NK92细
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目的 构建靶向分化群抗原19（CD19）的嵌合抗原受体（CAR）-NK92细胞，并观察其对相关肿瘤细胞的杀伤作用。方法 用XhoI/NotI限制性内切酶将靶向CD19的单链抗体序列与pMFG逆转录病毒载体进行双酶切，回收纯化片段后用连接酶进行连接，构建CAR001、CAR002质粒，进行NK92细胞的转导和逆转录病毒载体的包装，构建靶向CD19的CAR-NK92细胞，分别为CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞。构建表达CD19抗原的Rajiluc、SW620-EGFP、RPMI-hCD19-copGFP细胞。分别将NK92细胞、CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞与表达CD19抗原的肿瘤细胞共培养，分别采用流式细胞术（靶细胞为RPMI-hCD19-copGFP细胞）、荧光素酶报告基因法（靶细胞为Raji-luc细胞）和IncuCyte法（靶细胞为SW620-EGFP细胞）观察CAR-NK92细胞对肿瘤细胞的杀伤作用，采用流式细胞术观察CAR-NK92细胞对Daudi细胞增殖的影响。结果 CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞的CAR表达率分别为99.0%、98.4%,CD19抗原表达率分别为99.6%、99.3%，成功构建靶向CD19的CAR-NK92细胞。Daudi、Raji-luc、SW620-EGFP、RPMI-hCD19-copGFP细胞的CD19抗原表达率分别为99.0%、100%、100%、99.5%，表达CD19抗原的肿瘤细胞构建成功。NK92细胞、CAR001-NK92细胞、CAR002-NK92细胞在不同效靶比下对RPMIhCD19-copGFP细胞和SW620-EGFP细胞的杀伤效率依次增高（P均＜0.05）。CAR002-NK92细胞在不同效靶比下对Raji-luc细胞的杀伤效率均高于CAR001-NK92细胞（P均＜0.01）。NK92组和CAR002-NK92组细胞增殖能力低于CAR001-NK92组（P均＜0.05）。结论 成功构建的靶向CD19的CAR-NK92细胞，其对多种表达CD19抗原的肿瘤细胞具有明显的杀伤作用。
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