探讨建立人真皮微血管内皮细胞的缺氧后处理模型的方法。
方法采用酶消化加磁珠分选的方法，获得人真皮微血管内皮细胞，用5% ECM培养基培养，取第6～8代细胞备用，在进行缺氧处理后复氧前，将细胞进行3次一定时间的缺氧/复氧交替处理；将细胞接种于6孔板，1个6孔板为1组，共6组。1组：不作任何处理；2组：缺氧8 h＋复氧24 h；3组：缺氧8 h＋2 min×3次缺氧后处理；4组：缺氧8 h＋5 min×3次缺氧后处理；5组：缺氧8 h＋10 min×3次缺氧后处理；6组：缺氧8 h＋20 min×3次缺氧后处理。各组经过8 h缺氧箱＋缺氧Buffer的缺氧处理和24 h复氧后，检测乳酸脱氢酶(LDH)随缺氧时间含量的变化；Tunel法染色计算各组的细胞凋亡率；用Western Blot的方法检测Bcl-2、Bax和caspase-3以及活化caspase-3的蛋白含量表达。实验数据采用SPSS 18.0进行统计分析，2组间比较采用t检验，多组间比较采用方差分析。
结果在连续的缺氧过程中，LDH含量在8 h(1563±83.35)IU/L与0 h(582.85±58.25)IU/L比较，差异有统计学意义(P＝0.0001)。Western Blot结果：2组Bax/Bcl-2表达含量为0.38±0.02，2组与3组0.23±0.01和4组0.22±0.02比较，差异有统计学意义(P＝0.012，P＝0.005)，2组与5组0.33±0.02和6组0.34±0.01比较，差异无统计学意义(P>0.05)。2组活化的caspase-3/caspase-3比例为6.30±1.50，与3组2.17±0.26和4组2.63±0.31比较，差异有统计学意义(P＝0.008, P＝0.019)；2组与5组4.36±0.29和6组4.97±0.51比较，差异无统计学意义(P>0.05)。
结论成功地建立了人真皮微血管内皮细胞缺氧后处理模型。