【摘 要】
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目的 探讨PCR反应体系中Mg2 + 浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响。方法 从石蜡包埋组织中提取DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 13外显子 ,分析PCR反
【机 构】
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吉林大学中日联谊医院基本外科;大庆油田总医院普外科;日本东北大学医学部;吉林大学中日联谊医院基本外科吉林长春130031;吉林长春130031;吉林长春130031;
【基金项目】
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吉林省卫生厅医学科研基金资助课题2002046;中日甲状腺疾病基础研究合作项目(1993)资助
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目的 探讨PCR反应体系中Mg2 + 浓度对从石蜡包埋组织中提取DNA进行PCR反应的影响。方法 从石蜡包埋组织中提取DNA ,PCR反应扩增甲状腺髓样癌RET基因第 13外显子 ,分析PCR反应体系中Mg2 + 浓度分别为1 5mmol L、2 0mmol L、2 5mmol L、3 0mmol L、4 0mmol L时PCR反应产物中目的基因含量及对PCR产物基因序列测定的影响。结果 5种条件扩增的目的基因经纯化后DNA含量分别为 4 8ng μl(1 5mmol L)、2 6 6ng μl(2 0mmol L)、4 0 2ng μl(2 5mmol L)、38 5ng μl(3 0mmol L)、4 4 5ng μl(4 0mmol L) ;Mg2 + 浓度为 4 0mmol L时PCR产物电泳图见到多条非特异性条带 ;Mg2 + 浓度为 2 5mmol L时PCR产物直接测序反应曲线峰图背景噪音 (噪峰 )减小 ,信噪比 (信号 噪音 )增高。结论 从石蜡包埋组织中提取DNA行PCR反应 ,Mg2 + 浓度为 2 5mmol L时反应特异性强 ,PCR产物质量高。较高的Mg2 + 浓度可以增加PCR反应产量 ,但降低反应的特异性
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