【摘 要】
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目的 探讨miR-199a-5p靶向细胞分裂周期相关7样蛋白(CDCA7L)对胶质瘤细胞迁移及侵袭的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人正常星形胶质细胞HA1800与人胶质瘤细胞株U251中miR-199a-5p表达量;使用Lipofectamine 2000转染试剂盒对U251细胞进行转染,并分别命名为空白组(正常培养的U251细胞)、miR-NC组(转染miR-?NC)、miR-199a-5p mimic组(转染miR-199a-5p mimic)、miR-199a-5p?mim
【机 构】
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061000 沧州,河北省沧州市人民医院神经外科
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目的 探讨miR-199a-5p靶向细胞分裂周期相关7样蛋白(CDCA7L)对胶质瘤细胞迁移及侵袭的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测人正常星形胶质细胞HA1800与人胶质瘤细胞株U251中miR-199a-5p表达量;使用Lipofectamine 2000转染试剂盒对U251细胞进行转染,并分别命名为空白组(正常培养的U251细胞)、miR-NC组(转染miR-?NC)、miR-199a-5p mimic组(转染miR-199a-5p mimic)、miR-199a-5p?mimic+pcDNA组(共转染miR-199a-5p mimic和pcDNA)、miR-199a-5p?mimic+pcDNA-CDCA7L组(共转染miR-199a-5p mimic和pcDNA-CDCA7L),Transwell实验检测U251细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测CDCA7L蛋白表达情况;利用TargetScan软件预测miR-199a-5p和CDCA7L结合位点;双荧光素酶报告基因检测验证miR-199a-5p与CDCA7L靶向关系;HA1800、U251两组细胞间的比较采用两样本t检验;多组间比较采用单因素方差分析,两组间比较采用SNK-q检验.结果 与HA1800细胞比较,U251细胞中miR-199a-5p表达水平降低(1.09±0.26比0.32±0.14),CDCA7L蛋白表达量升高(0.21±0.02比0.85±0.13),差异具有统计学意义(P均<0.001).miR-199a-5p mimic组细胞迁移数、侵袭数及CDCA7L蛋白表达量均低于空白组、miR-?NC组(50.12±3.36比94.57±7.14、93.86±6.11;42.53±3.34比71.49±4.35、73.76±4.21;0.25±0.07比0.83±0.12、0.89±0.09),差异具有统计学意义(P均<0.001).CDCA7L为miR-199a-5p靶基因.过表达CDCA7L可逆转miR-199a-5p对U251细胞迁移及侵袭的抑制作用(P<0.05).结论 在胶质瘤细胞中miR-199a-5p呈低表达,上调miR-199a-5p可能通过靶向抑制CDCA7L蛋白表达,进而抑制胶质瘤细胞的迁移和侵袭.
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