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目的:建立毕赤酵母(pichia)高密度表达的重组水蛭素(recombinant hirudin-2,rHV2)分离纯化工艺.方法:高密度培养重组毕赤酵母并诱导表达水蛭素至胞外,发酵液经超滤、透析、离子交换层析,分离纯化rHV2目的蛋白;采用SDS-PAGE和抗凝血酶活力分别检测目的蛋白纯度和活性.结果:纯化样品经SDS-PAGE电泳检测为单一条带,重组水蛭素比活性为6000 ATU/mg,纯化收率达38.6 %.结论:超滤、透析和离子交换层析可用于发酵液中大规模分离纯化重组水蛭素.