【摘 要】
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根据ERNascimento等从鸡毒支原体(Mycoplasmagallisepricum,MG)基因文库分离的种特异性片段fMG2序列,设计合成一对长25bp的引物L1R1,经PCR反应条件优化选择,对5株MGDNA扩增均
【机 构】
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山西农业大学动物医学系!太谷030801;
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根据ERNascimento等从鸡毒支原体(Mycoplasmagallisepricum,MG)基因文库分离的种特异性片段fMG2序列,设计合成一对长25bp的引物L1R1,经PCR反应条件优化选择,对5株MGDNA扩增均产生出预期的732bp特异扩增片断,而不能扩增滑液支原体(Mycoplasmasynoviae,MS)、Ecoli、PUC19质粒DNA,符合设计要求;DIG随机引物法标记扩增产物制成DNA探针,与上述菌株DNADotblot杂交,MG呈阳性,其它为阴性;将扩增产物克隆于pGEMT载体,经EcoRI和RsaI酶切,证实克隆片段与目的DNA大小及酶切位点相同;测序结果表明扩增片段与fMG-2靶序列同源性达972%,与已发表的DNA序列无明显同源性。说明所建PCR方法种特异性强,特异扩增片段克隆成功。
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