人卵巢癌cDNA噬菌体表达文库的构建及鉴定

来源 :中国妇产科临床杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:guoxiuguo
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目的构建人卵巢癌cDNA噬菌体表达文库。方法培养人卵巢肉瘤样癌细胞系细胞,提取总RNA,在RNA转录本5′末端开关机制(switching mechanismat5′end of RNAtranscript,SMART)寡核苷酸参与下,反转录合成cDNA第一链,用长距离聚合酶链式反应(long-distance PCR,LD-PCR)合成cDNA第二链并扩增双链DNA,鉴定扩增产物。采用层析离心柱除去小于500bp的片段后,与去磷酸化的SfiⅠ酶消化的λTriplEx2噬菌体载体连接,用GigapackⅢ
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