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目的
构建和鉴定可用于甲病毒快速检测的工程细胞株。
方法以辛德毕斯病毒缺陷型复制子载体系统pVaXJ-EGFP-△NSP4为基础，利用慢病毒表达载体pCDH系统，获得含有绿色荧光蛋白(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)报告基因的慢病毒表达质粒pCDH-XJ-EGFP。使用脂质体转染法将质粒pCDH-XJ-EGFP和包装质粒pPACKH1 Mix共转染HEK293T细胞，48 h、72 h收集慢病毒颗粒用于感染BHK-21细胞，经嘌呤霉素筛选获得用于蚊媒甲病毒检测的细胞系BHK-Alphavirus。
结果BHK-Alphavirus感染辛德毕斯病毒48 h后，可检测到EGFP的表达，表明BHK-Alphavirus能够用于外源甲病毒的检测。BHK-Alphavirus细胞感染甲病毒属中的辛德毕斯病毒(XJ-160和YN87448)、基孔肯雅病毒(SD08Pan)及盖塔病毒(HB0234)均可以检测到特异的绿色荧光，而被黄病毒属的乙脑病毒(P3)、4型登革病毒(P4)和布尼亚病毒属的塔希纳病毒(XJ0625)等其他正链RNA病毒感染后则检测不到绿色荧光。
结论BHK-Alphavirus细胞可用于蚊媒甲病毒的快速检测，且该检测方法特异性良好。