人类偏肺病毒F基因真核表达质粒的构建及表达

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目的:构建人类偏肺病毒融合蛋白(F)基因的真核表达质粒,并在昆虫细胞sf-9中表达。方法:采用RT—PCR法扩增人类偏肺病毒A亚型CAN97—83F基因的全长序列,将其插入供体质粒pFastBacHT载体多克隆位点区,经酶切鉴定后转化大肠杆菌DH10bac。供体质粒与受体杆粒(Bacmid)发生位点特异性转座获得重组的杆粒。采用脂质体将重组杆粒转染进昆虫细胞sf-9,包装获得感染性杆状病毒。用此病毒感染sf-9细胞并表达蛋白,经6×His树脂纯化后用免疫印迹法验证表达蛋白。结果:PCR及序列分析
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