【摘 要】
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在大肠杆菌中表达西农萨能羊脂肪分化相关蛋白(ADRP),并制备其多克隆抗体。以实验室保存的pMD19-T-ADRP质粒为模板,扩增ADRP的CDS区,将其克隆到pET32a(+)载体,阳性克隆转化到
【基金项目】
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公益性行业(农业)科研专项(201103038);转基因生物新品种培育项目(2009ZX08009-162B)
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在大肠杆菌中表达西农萨能羊脂肪分化相关蛋白(ADRP),并制备其多克隆抗体。以实验室保存的pMD19-T-ADRP质粒为模板,扩增ADRP的CDS区,将其克隆到pET32a(+)载体,阳性克隆转化到大肠杆菌菌株E.coli BL21(DE3)中诱导表达,优化融合蛋白表达条件,使用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白,纯化的ADRP蛋白经复性后免疫兔子制备多克隆抗体,ELISA和Western blot检测血清效价和特异性。结果表明:成功构建pET32a(+)-ADRP原核表达载体并诱导其表达,获得最佳表达条件,即37℃、0.5 mmol/L IPTG诱导6 h;ELISA检测显示抗体效价达1∶64 000;经Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能特异性结合原核表达以及乳腺上皮细胞表达的ADRP蛋白。本实验成功表达、纯化了ADRP融合蛋白,获得具高特异性、高效价的兔抗ADRP多克隆抗体。
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