【摘 要】
：
检测构建于真核表达载体PCI上的禽流感H5亚型(H5N1)HA基因的基因转染效率及瞬时表达,为基因疫苗的体外表达提供依据.在体外扩增并酶切鉴定PCIHA质粒;常规方法培养COS-7细胞;
论文部分内容阅读
检测构建于真核表达载体PCI上的禽流感H5亚型(H5N1)HA基因的基因转染效率及瞬时表达,为基因疫苗的体外表达提供依据.在体外扩增并酶切鉴定PCIHA质粒;常规方法培养COS-7细胞;质粒与脂质体按照不同的比例混合,以脂质体介导法转染PCIHA,应用荧光显微镜观察转染效率及瞬时表达情况.结果表明转染效率与质粒和脂质体的比例有关,基因转染在24h后开始表达,48～72 h表达量最高.本试验通过以脂质体不同剂量的优化方法转染COS-7细胞,获得了较高效率的表达,证实了AIV HA基因DNA疫苗可在体外表达.
其他文献
我国从20世纪70年代开始使用EIAV弱毒疫苗后,在全国范围内基本控制了马传贫的发生,我们从现地少数EIAV琼扩阳性马外周血中扩增并克隆了二株EIAV前病毒5'LTR序列,并与国内
利用Real-time PCR和Real-time RT-PCR方法对马传染性贫血病(EIA)驴白细胞弱毒疫苗(DLA-EIAV)、DLA-EIAV感染性分子克隆衍生毒(vOK8226)、强弱毒嵌合病毒(vOKVltr)以及EIA强
以临床分离的猪圆环病毒2型（PCV2）为材料，利用PCR法扩增病毒基因组，将2个基因组顺式连接插入到质粒载体中构建感染性分子克隆。通过引物设计替换碱基，在病毒基因组内插入Sal Ⅰ限
利用特异性引物从pBluemCAV中PCR扩增得到鸡贫血病病毒（CAV）vp1、vp2基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理,纯化后,克隆至EcoRⅠ和NotⅠ双酶切处理的表达载体pPIC9K中,构建了真核表
根据酵母表达系统的密码子偏爱性、poly（A）信号以及外源基因mRNA5′端的二级结构等特性，对猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）ORF6基因进行简并改造和人工合成，然后以正确的读码框架插
A／Ann Arbor／6／60Ca（H2N2）冷适应疫苗供体株具有冷适应性、温度敏感性和致弱性表型。本研究利用基因工程技术体外合成A／Ann Arbor／6／60Ca（H2N2）冷适应疫苗株具有冷适应性的内部基因PB2
猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)嗜好在PAM和其他单核细胞上生长,如果把PRRSV作为一种病毒活载体,它就可以携带外源抗原高效进入猪体的免疫系统,更好地刺激机体产生免疫应答.
对猪繁殖与呼吸综合征病毒的非结构基因（ORF1）和非编码区分别进行了克隆和测序，并对其基因特征作了分析。结果表明，CH-1a株ORF1全长11882nt，其中ORF1a长7512nt、ORF1b长4374nt。它
分别将猪圆环病毒2型的ORF2基因和猪繁殖与呼吸综合征病毒的ORF5基因，插入到鸡痘病毒转移载体pUTA2—16-LacZ单一启动子和复合启动子下游，构建重组鸡痘病毒转移质粒pUTAL-ORF5-
从含有猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）核衣壳蛋白（N）的质粒扩增出N基因，构建禽痘病毒转移载体。该载体含有禽痘病毒早晚期启动子LP2EP2控制之下的PRRSVN基因、P11启动下的报告基因