【摘 要】
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目的比较研究外源正义和反义p53对所转染细胞系恶性表型的影响.方法构建正义和反义p53 cDNA真核细胞表达载体pEGFP-p53(RS)和pEGFP-p53(AS),用Lipofectin介导转染801D细胞.PC
【机 构】
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北京市结核病胸部肿瘤研究所细胞分子生物学实验室,中科院生物物理所
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目的比较研究外源正义和反义p53对所转染细胞系恶性表型的影响.方法构建正义和反义p53 cDNA真核细胞表达载体pEGFP-p53(RS)和pEGFP-p53(AS),用Lipofectin介导转染801D细胞.PCR检测外源p53和neo基因.荧光显微镜检查转染细胞绿荧光蛋白.免疫组化染色检测突变蛋白表达.比较pEGFP-p53(AS)-801D和pEGFP-p53(RS)-801D的集落形成试验和裸鼠移植试验.用流式细胞术分析细胞周期.结果 PCR检测出外源p53和neo基因存在于细胞,细胞可见绿色荧光.免疫组化检测示pEGFP-p53(AS)-801D突变蛋白呈阴性,母系为阳性,表明反义p53能封闭突变p53蛋白表达.pEGFP-p53(RS)-801D和pEGFP-p53(AS) 801D细胞集落形成率和裸鼠移植成瘤性均降低,pEGFP-p53(RS)-801D更为明显.pEGFP-p53(AS)-801D细胞周期阻滞于G1期.结论在同一细胞背景下,p53缺失比p53突变对恶性增殖起更重要的作用.外源野生型p53在肿瘤细胞中可恢复重建其功能,外源反义p53可封闭突变蛋白表达,阻止细胞停留于G1期.
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