【摘 要】
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目的筛选人锌转运体8(Zinc transporter8,ZnT8)中强免疫原性片段,并对其进行克隆表达及鉴定。方法采用生物信息学软件预测ZnT8结构特征,筛选出具有强免疫原性的N末端片段ZnT8
【基金项目】
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第三军医大学临床科研基金(2008XG20)~~
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目的筛选人锌转运体8(Zinc transporter8,ZnT8)中强免疫原性片段,并对其进行克隆表达及鉴定。方法采用生物信息学软件预测ZnT8结构特征,筛选出具有强免疫原性的N末端片段ZnT8(N),经PCR(Polymerase Chain Reaction)技术扩增,构建表达质粒pET32a-ZnT8(N),转化入E.coliBL21(DE3)中,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的蛋白的表达,并对表达产物进行SDS-PAGE分析及Westernblot鉴定。结果从ZnT8分子中筛选出具有140个氨基酸的肽段ZnT8(N),重组质粒pET32a-ZnT8(N)经酶切和测序鉴定证实构建成功。转入大肠杆菌进行表达,表达产物相对分子质量(Mr)约32000,与预期值相符,并经免疫印迹检测鉴定为阳性,融合蛋白的表达量约占菌体蛋白总量45%。结论筛选获得了人胰岛细胞来源的ZnT8强免疫原性片段,并在原核系统中成功表达。
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