【摘 要】
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目的:探讨抑制KIF18B分子表达后对人急性髓系白血病HL60细胞增殖、凋亡、自噬的影响及其机制.方法:选择HL60细胞随机分为3组,利用脂质体2000分别转染KIF18B-siR、NC-siR及Control组细胞,采用qRT-PCR法验证转染后HL60细胞中KIF18B的表达;CCK-8法检测HL60细胞增殖能力变化;流式细胞技术检测抑制KIF18B表达对HL60细胞凋亡能力及细胞周期的影响;通过透射电镜观察各组细胞溶酶体中自噬小体变化情况;采用Western blot检测与增殖、凋亡、自噬相关的蛋白
【机 构】
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西南医科大学附属中医医院肿瘤血液二科,四川 泸州 646000;内江市中医医院血液科,四川 内江 641107
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目的:探讨抑制KIF18B分子表达后对人急性髓系白血病HL60细胞增殖、凋亡、自噬的影响及其机制.方法:选择HL60细胞随机分为3组,利用脂质体2000分别转染KIF18B-siR、NC-siR及Control组细胞,采用qRT-PCR法验证转染后HL60细胞中KIF18B的表达;CCK-8法检测HL60细胞增殖能力变化;流式细胞技术检测抑制KIF18B表达对HL60细胞凋亡能力及细胞周期的影响;通过透射电镜观察各组细胞溶酶体中自噬小体变化情况;采用Western blot检测与增殖、凋亡、自噬相关的蛋白AMPK、mTOR、P70S6K、4EBP1及ULK1的表达.结果:qRT-PCR结果显示,与Control和NC-siR组相比,KIF18B-siR组KIF18B mRNA表达水平显著下降(P<0.05);CCK-8实验结果表明,siRNA干扰KIF18B表达后,可以抑制HL60细胞增殖,有统计学差异(P<0.05);流式检测结果显示,与Control组和NC-siR组相比,抑制KIF18B表达能促使HL60细胞G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,阻滞细胞周期,促进HL60细胞大量凋亡;透射电镜观察到,与Control和NC-siR组相比,KIF18B-siR组溶酶体内分布有大量的自噬小泡;Western blot结果表明,KIF18B-siR组p-AMPK和p-ULK1表达上调,p-mTOR、p-P70S6K及p-4EBP1表达下调,结果有显著差异(P<0.05).结论:抑制KIF18B表达可以抑制人急性髓系白血病HL60细胞增殖,促使细胞周期发生阻滞,诱导凋亡和自噬,调控机制可能与激活AMPK/mTOR通路有关.
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