【摘 要】
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目的建立依诺肝素钠特异性末端结构1,6-脱水衍生物结构的含量测定方法。方法肝素酶混合液将依诺肝素钠水解成二糖或四糖单位,水解得到的寡糖峰经硼氢化钠还原后用-高效阴离子
【基金项目】
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国家质量监督检验检疫总局公益性行业专项“双打”中药品检验检测技术方法研究,子课题《低分子肝素标准提高研究》资助项目(2012104008);中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金课题《低分子肝素质控对照品、标准试剂的制备及标化》资助项目(2012A5)
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目的建立依诺肝素钠特异性末端结构1,6-脱水衍生物结构的含量测定方法。方法肝素酶混合液将依诺肝素钠水解成二糖或四糖单位,水解得到的寡糖峰经硼氢化钠还原后用-高效阴离子交换色谱法方法进行分析。采用Waters Spherisorb S5 SAX(4.0 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以0.28 g·L-1磷酸二氢钠溶液为流动相A含0.28 g·L-1磷酸二氢钠及140 g·L-1高氯酸钠的溶液为流动相B进行梯度洗脱(0~20 min,3%~35%B;20~50 min,35%~100%B;50~60 min,100%B;60~61 min,100%~3%B,61~79 min,3%B),流速0.8 mL·min-1,柱温为50℃;检测波长为234 nm,并用归一化面积百分比法计算摩尔百分含量。结果筛选出了酶解效果达标的国产肝素酶并优化了酶解条件,酶解后1,6-脱水ΔⅠS-ⅠS与1,6-脱水ΔⅠS峰面积比<1.15;优化色谱条件后ΔⅠA和1,6-脱水ΔⅠS的分离度>1.5;硼氢化钠还原后的溶液色谱图中,ΔⅠS和还原ΔⅠS的峰面积比均小于0.02;两家国产依诺肝素钠生产企业样品结果均在15%~25%内。结论方法可对依诺肝素钠特征还原末端结构进行分离和定量,作为对低分子肝素进行微观结构分析的首个鉴别项目,已收载入新修订依诺肝素钠国家标准草案中。
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