【摘 要】
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目的 构建旋毛虫氨基肽酶(TsAP)基因重组质粒,表达重组TsAP蛋白,评价该蛋白的血清学诊断价值.方法 通过RT-PCR扩增TsAP基因,构建重组质粒pGEX-6p-1-TsAP,测序及酶切鉴定后转
【机 构】
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郑州大学医学院寄生虫学教研室,河南郑州,450052
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目的 构建旋毛虫氨基肽酶(TsAP)基因重组质粒,表达重组TsAP蛋白,评价该蛋白的血清学诊断价值.方法 通过RT-PCR扩增TsAP基因,构建重组质粒pGEX-6p-1-TsAP,测序及酶切鉴定后转化E.coli BL21,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,表达产物经GST Sefinose Resin (BBI)亲和层析纯化后应用SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定.应用旋毛虫重组rTsAP蛋白ELISA(rTsAP-ELISA)对旋毛虫感染小鼠血清进行检测,观察旋毛虫感染小鼠后不同时间的血清抗体阳性率,并与旋毛虫肌幼虫ES抗原ELISA (ES-ELISA)的检测结果进行比较.结果 构建的重组表达载体pGEX-6p-1-TsAP能表达TsAP蛋白.SDS-PAGE结果显示,rTsAP的分子质量单位约为80 ku,以IPTG诱导4h后表达量最大.rTsAP-ELISA及ES-ELIS对旋毛虫感染小鼠血清的抗体检出率均为100％(40/40),与曼氏裂头蚴、弓形虫感染小鼠及正常小鼠血清均无交叉反应,与日本血吸虫感染小鼠血清的交叉反应率分别为93.75％(15/16)和50.00％(8/16)(P＜0.05).rTsAP-ELISA与ES-ELISA对旋毛虫感染2周的小鼠血清抗体检出率分别为50.00％(11/22)和81.82(18/22),差异无统计学意义(P＜0.05),至感染后6周抗体检出率均达100％.结论 重组TsAP蛋白具有良好的反应原性,但与日本血吸虫感染小鼠血清有较高的交叉反应.
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