【摘 要】
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为了确保反应体系的可行性,以便更好地开展大蒜野生近缘种的SRAP标记的遗传多样性分析,本研究以新疆大蒜野生近缘种为材料,采用L16(44)正交法,对其反应体系进行4因素4水平优
【机 构】
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新疆农业大学林学与园艺学院,乌鲁木齐,830052;昌吉市农机推广站,昌吉,831100;乌鲁木齐市米东区农业技术推广中心,乌鲁木齐,831400
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为了确保反应体系的可行性,以便更好地开展大蒜野生近缘种的SRAP标记的遗传多样性分析,本研究以新疆大蒜野生近缘种为材料,采用L16(44)正交法,对其反应体系进行4因素4水平优化试验.结果表明:对大蒜野生近缘种PCR扩增影响最大的是dNTPs浓度,影响最小的是Taq酶浓度.筛选出15对引物,经过程序和温度筛选,最终确定SRAP的反应程序为:94℃条件下预变性1 min,其次在94℃变性1 min、35℃退火1 min、72℃延伸1min的环境下进行5个循环的反应,再与前5个循环相同环境下,提高其退火温度至52℃进行35个循环,最后72℃延伸10 min.2μL 10×PCR Buffer,dNTPs浓度0.225 mmol/L,引物浓度0.250 μmol/L,Taq酶用量1.000 U,模板DNA用量75.000 ng,ddH2O补足20 μL,为最佳SRAP-PCR反应体系.研究结果为进一步开展大蒜野生近缘种的遗传多样性分析、亲缘关系鉴定和分子标记辅助育种提供技术支持.
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