【摘 要】
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目的 研制出一种双重调控的选择增殖型腺病毒载体系统.方法先后经2次定点突变重叠聚合酶链反应(PCR)技术使腺病毒E1A及E1B启动子缺失,并将人工合成的人端粒酶逆转录酶启动子和缺氧反应启动子分别插入E1A及E1B基因的上游,得到腺病毒载体质粒pSG500.通过pSG500与质粒phGE3在293细胞中同源重组得到重组病毒ChK500.扩增、纯化病毒,用TCID50方法测病毒滴度.通过病毒增殖实验观
【机 构】
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200438,上海,第二军医大学东方肝胆外科医院病毒和基因治疗中心,200438,上海,第二军医大学东方肝胆外科医院病毒和基因治疗中心,200438,上海,第二军医大学东方肝胆外科医院病毒和基因治疗中
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目的 研制出一种双重调控的选择增殖型腺病毒载体系统.方法先后经2次定点突变重叠聚合酶链反应(PCR)技术使腺病毒E1A及E1B启动子缺失,并将人工合成的人端粒酶逆转录酶启动子和缺氧反应启动子分别插入E1A及E1B基因的上游,得到腺病毒载体质粒pSG500.通过pSG500与质粒phGE3在293细胞中同源重组得到重组病毒ChK500.扩增、纯化病毒,用TCID50方法测病毒滴度.通过病毒增殖实验观察重组病毒的选择性增殖能力.结果成功构建了由双重调控选择增殖型腺病毒ChK500,病毒滴度为1.9×10 10 pfu/ml,增殖实验结果证实ChK500可以选择性地在端粒酶阳性肿瘤中增殖.结论 ChK500为肿瘤的生物治疗提供了一种新的策略。
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