喉黏膜间充质干细胞肌向分化的实验研究

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目的

将喉黏膜间充质干细胞(laryngeal mucosal mesenchymal stem cells,LM-MSC)向成肌细胞诱导分化,为声带部分或全部缺失的组织工程修复寻求优势种子细胞.

方法

从正常会厌舌面黏膜分离培养获得LM-MSC,流式细胞仪检测细胞表面分子标志CD44、CD105、CD90、CD29、CD34和CD45;向成脂、成骨细胞分化鉴定细胞多向分化潜能,油红O、茜素红染色鉴定成脂、成骨分化情况;加入成肌诱导液向成肌细胞方向分化,于成肌诱导分化后1周和3周时行免疫荧光化学染色,诱导后1周、3周和6周行实时定量RT-PCR分析,以分别定性和定量分析成肌分化相关蛋白及基因Myod1、Myogenin、肌球蛋白重链(myosin heavy chain,MyHc)的表达.

结果

本实验分离培养获得的LM-MSC可贴壁生长,呈长梭形;高表达间充质干细胞表面分子标志物:CD44(100.0%),CD105(90.4%),CD90(99.9%),CD29 (93.0%),低表达造血系干细胞表面分子标志物:CD34(0.4%)和CD45(1.3%);LM-MSC在体外定向向成脂、成骨分化14 d和21 d后有大量串珠样脂滴和矿化结节生成;成肌细胞初始标志蛋白Myod1和特异性标志蛋白Myogenin,MyHc分别于成肌诱导分化后1周和3周出现,RT-PCR结果与免疫荧光化学染色结果一致,并且相关基因持续表达于成肌诱导分化后6周.

结论

LM-MSC符合间充质干细胞的特性,并可定向分化为成肌细胞,有潜能成为声带组织工程修复的优势种子细胞.

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