目的 探讨转录因子E2F1和E2F4在维生素C逆转苯并(a)芘引起人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期改变中的作用,及其与细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖激酶 4(CDK4)的上下游关系.方法接种细胞到培养瓶,待生长至70%～80%时,维生素C预处理细胞1 h后,用苯并(a)芘刺激细胞24 h,运用流式细胞术测定细胞周期时相分布,用免疫印迹法检测蛋白含量,用Gel-Pro 3.0软件对条带光强度进行分析,脂质体转染法建立稳定转染反义cyclin D1或反义CDK4的HELF系,应用反义技术证明通路的上下游关系.结果苯并(a)芘诱导HELF中cyclin D1、CDK4、E2F1和E2F4的蛋白表达升高,并伴随S期细胞百分率从(33.5±3.2)%上升至(41.1±0.2)%.维生素C可降低苯并(a)芘诱导的HELF S期细胞百分率至(33.2±0.6)%,并抑制苯并(a)芘诱导的HELF上述蛋白的表达.反义cyclin D1和反义CDK4均可抑制苯并(a)芘诱导的HELF上述蛋白的表达,反义cyclin D1可使苯并(a)芘诱导的HELF S期细胞百分率降低至(31.2±1.3)%.维生素C联合反义cyclin D1与单独反义cyclin D1相比,可进一步降低苯并(a)芘诱导的HELF上述蛋白的表达,且能够抑制苯并(a)芘诱导的HELF的S期细胞百分率,使其从(41.1±0.2)%下降为(34.0±0.3)%.维生素C联合反义CDK4可降低苯并(a)芘诱导的HELF的S期细胞百分率,使其从(41.1±0.2)%下降为(33.7±1.5)%,而且与单独反义CDK4相比,可进一步降低苯并(a)芘诱导的HELF的S期细胞百分率.结论维生素C可能通过cyclin D1-CDK4/ E2F-1/4通路逆转苯并(a)芘引起的细胞周期改变。