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目的
体外研究验证小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中Lasp1蛋白及铁蛋白在骨形态发生蛋白2(BMP2)介导成骨中的机制。
方法从3~18个月龄的C57BL/6J小鼠体内分离、纯化出MSCs，并传代至第3代后，分为3组：实验组的高糖培养基内加入100 μg/L的BMP2及成骨诱导液，阳性对照组加入单纯的成骨诱导液，空白对照组不做处理。3组分别诱导7、14、21 d，并采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测4个成骨相关标记基因：Runt相关转录因子2、骨钙素、Osterix蛋白、骨桥素，以确认是否分化成骨。确认成骨后，采用蛋白印迹法检测成骨结果阳性组细胞中的Lasp1蛋白及铁蛋白各自的表达浓度。以慢病毒转染基因沉默技术下调小鼠MSCs的Lasp1蛋白的基因表达，并重新进行BMP2介导的诱导成骨过程，再进行上述成骨标志基因的RT-qPCR检测。
结果RT-qPCR过程显示实验组和阳性对照组显示诱导成骨，且实验组诱导成骨效果更佳。蛋白印迹法检测结果显示仅实验组中的Lasp1蛋白明显表达量下调而铁蛋白表达量明显上调。采用慢病毒转染基因沉默技术下调Lasp1蛋白表达量后，成骨相关基因表达量明显上调。
结论BMP2可以介导小鼠MSCs诱导成骨，且成骨诱导效果极佳。结合前期研究，我们可以确认Lasp1蛋白及铁蛋白参与调控BMP2的信号通路，且Lasp1蛋白对BMP2介导的诱导成骨呈抑制作用。