目的:药品中外源性残留蛋白不仅影响药品质量,且严重威胁人用药安全.青霉素G酰基转移酶(简称PGA)是酶法工艺生产β-内酰胺抗生素过程中所用关键催化酶,有必要对其进行研究并严格控制终产品中的蛋白残留量.已有方法采用凝胶过滤法(GFC)对残留蛋白进行前处理,但该法存在富集效率低等诸多问题.本文探讨并尝试建立一种不同方式和原理的蛋白分离、富集方法,采用超滤前处理结合考马斯亮蓝(Bradford)法测定酶法工艺产品阿莫西林中残留蛋白的含量.方法:采用Amicon(@)Ultra-15型超滤管(15mL,截留分子量为3 kDa)对阿莫西林供试液进行前处理,离心力为5000 g(7000rpm),对溶液进行净化并对蛋白进行浓缩富集,再采用Bradford法对浓缩液进行蛋白定量测定,检测波长为595 nm.结果:该法具有较好的专属性;蛋白浓度在1.0～100.0μg·mL-1(r=0.9921)内校正曲线(lgA～lg C)的线性关系良好;回收率＞72％(n=3×3);Bradford法最低检出限为0.1 μg· mL-1,相当于0.0001％;Bradford法的精密度≤5.0％.结论:该方法准确、可靠,相比于已有方法,蛋白富集量更大、操作简便、设备要求低,可用于酶法工艺阿莫西林中残留蛋白的测定,对酶法工艺半合成抗生素中残留蛋白的质控及酶法工艺稳定性监测提供了一定技术指导.