背景 本课题组前期已筛选得到了靶向转化生长因子-β(TGF-β)Ⅱ型受体(TβRⅡ)的核酸适配子S58,并证明S58可抑制TGF-β介导的人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)转分化作用.壳聚糖纳米微粒(CS-NP)已被证实可作为药物载体,但其包埋S58后抑制HTFs增生的有效性和安全性值得关注. 目的 制备CS(S58)-NP,研究其生物学特性,并观察CS-NP对S58的保护及缓释作用.方法 本研究所用细胞由本课题组前期原代培养的HTFs传代而来,取第4～10代对数生长期的细胞用于实验.以S58为实验对象,通过离子交联法制备出不同浓度CS-NP与S58表面电荷比(N/P比)的CS(S58)-NP.应用Zeta粒径分析仪检测CS(S58)-NP粒径及其Zeta电位;用扫描电子显微镜观察粒径的大小、形态及分布情况;采用琼脂糖凝胶电泳法检测CS-NP与S58的结合情况,并评估CS(S58)-NP对核酸酶的抵抗能力;用紫外分光光度计检测不同时间点缓释液PBS中S58的含量,以判断CS(S58)-NP缓释S58的情况;利用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测CS(S58)-NP对HTFs的细胞毒性. 结果 制备的CS(S58)-NP粒径分布于130～ 270 nm之间,其Zeta电位分布范围为+16 ～ +28 mV;扫描电子显微镜下可观察到CS(S58)-NP呈球形,分布均匀,粒径在300 nm以内.当CS-NP与S58 N/P比例为10、20、30、40时,CS(S58)-NP平均包封率分别为88.9％、89.3％、91.7％、90.5％;加入DNase Ⅰ组与无DNase Ⅰ组比较,S58经CS-NP包裹后能够明显抵御DNase Ⅰ的酶解作用;体外缓释实验发现,CS-NP在PBS中持续缓慢释放S58,随着时间的延长,S58累计释放量增加,以24 ～ 36 h释放速率最高,96 h S58累计释放量为100％.随着CS(S58)-NP浓度的增加,HTFs上清液中LDH相对释放率逐渐增加,差异有统计学意义(F=588.018,P=0.000).50 nmol/L CS(S58)-NP处理HTFs 48 h时LDH相对释放率最大,为(12.853±0.375)％. 结论 CS-NP对S58具有保护及缓释作用,其浓度在50 nmol/L以下时对HTFs的毒性作用小,具有良好的生物相容性,可用于核酸适配子的载体研究.CS(S58)-NP可用于抑制TGF-β介导的HTFs转分化研究。
壳聚糖纳米微粒对靶向转化生子因子-βⅡ型受体核酸适配子的缓释作用及其安全性研究
【摘 要】
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背景 本课题组前期已筛选得到了靶向转化生长因子-β(TGF-β)Ⅱ型受体(TβRⅡ)的核酸适配子S58,并证明S58可抑制TGF-β介导的人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)转分化作用.壳聚糖纳米微粒(CS-NP)已被证实可作为药物载体,但其包埋S58后抑制HTFs增生的有效性和安全性值得关注. 目的 制备CS(S58)-NP,研究其生物学特性,并观察CS-NP对S58的保护及缓释作用.方法 本研
【机 构】
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400042重庆,第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科,400042重庆,第三军医大学大坪医院一室,400042重庆,第三军医大学大坪医院野战外科研究所眼科,400042重庆,第三军医大学大坪医院野
【出 处】
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中华实验眼科杂志
【发表日期】
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2013年31期
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