【摘 要】
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为探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)蛋白对人结肠癌HCT-8细胞的生物学作用,本实验将重组载体PcDNA3.1-DCN /His(M-DCN)稳定转染入HCT-8细胞,并将携带有目的基因的细胞进行扩增
【机 构】
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北华大学附属医院肛肠外科 吉林吉林132011北华大学附属医院神经内科 吉林吉林132011;吉林大学第一临床医院神经内科 吉林长春130021;
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为探讨核心蛋白聚糖(decorin,DCN)蛋白对人结肠癌HCT-8细胞的生物学作用,本实验将重组载体PcDNA3.1-DCN /His(M-DCN)稳定转染入HCT-8细胞,并将携带有目的基因的细胞进行扩增培养,然后应用RT-PCR及Western Blot法对M DCN在细胞mRNA及蛋白水平的表达分别进行鉴定,应用MagExtractor方法提取携带有M DCN基因组HCT-8细胞(HCT-8-DCN)中的DCN蛋白,应用Bradford法测定提取蛋白的含量;同时,按DCN蛋白30μg/ml对HCT-8细胞进行培养,应用MTT法检测细胞增殖活力,细胞培养96h后用流式细胞术分析细胞周期.结果显示,RT PCR及Western Blot实验均可见到目的条带,证实M-DCN转染HCT-8细胞成功并实现稳定表达.实现了针对6个组氨酸标签使用MagExtractor方法对DCN蛋白的提取.加入DCN蛋白培养HCT-8细胞组细胞生长曲线呈现为生长抑制;流式细胞术结果提示G1期细胞显著增多.结果表明,DCN蛋白具有抑制HCT-8细胞增殖的作用.
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