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[摘要]目的探讨黄精采用不同方法炮制后对其成分的影响。方法采用蒽酮-硫酸法测定黄精多糖含量。热浸法测定醇溶性浸出物。薄层色谱法分析成分变化。结果黄精经临制后。多糖含量降低。多糖含量由高到低分别为黄精片，九制黄精，酒黄精，制黄精;同时炮制后。制黄精浸出物降低。酒黄精、九制黄精浸出物略有升高。浸出物由高到低分别为：九制黄精>酒黄精>黄精片>制黄精;薄层色谱分析表明各炮制品鼢无明显差异。结论黄精临方炮制后。多糖含量降低;浸出物含量酒黄精及九制黄精略升高。其他成分的变化有待于进一步深入研究。
[关键词]黄精;黄精多糖;浸出物;炮制;薏酮-硫酸法;热浸法;薄层色谱法
[中圖分类号]R283 [文献标识码]A [文童编号]2096-5249（2019）14-281-03
黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll。etHemsl、黄精Polygonatum sibiricum Red。或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎。按形状不同，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。黄精为临床常用补益药，归脾、肺、肾经，其性味甘平，具有补气养阴，健脾润肺，益肾的功效，用于脾胃气虚，体倦乏力，胃阴不足，口干食少，肺虚燥咳，劳嗽咳血，精血不足，腰膝酸软，须发早白，内热消渴等病症。生黄精具有麻味，生品服用时，口舌麻木，刺激咽喉。接触过生黄精或其汁液的皮肤会产生瘙痒的感觉，久闻其生味，有刺目之感，故多炮制后入药。通过炮制，一方面可制其毒副作用，消除麻味，减轻对咽喉的刺激性，糖性变浓烈，口感好，利于服用;另一方面，黄精经炮制后转变药性，利于有效成分积累，可提高黄精的临床疗效，增强药物补脾润肺，益肾的作用。至清末，黄精的炮制方法多达十余种，但以蒸煮法为主，现代的炮制方法中又增加了加辅料蒸等不同的工艺方法。据不完全统计，黄精的临方炮制品多为黄精片（药典）、酒黄精（药典，酒炖法或酒蒸法，每100kg黄精，用黄酒20kg。）、制黄精（四川炮制规范，用黑豆熬取浓汁，浸拌润透心，蒸至内外呈滋润黑色，干燥。每100kg黄精用黑豆10kg）、九制黄精。为了探讨这些炮制方法使黄精的成分发生了什么改变，本实验通过测定黄精不同炮制品中多糖、浸出物含量变化并对其薄层色谱进行比较研究，试探黄精临方炮制的实际意义，为阐明黄精炮制作用机制研究奠定基础。
1试验仪器与材料
1.1仪器
手提式高速粉碎机：DFT-100A（温岭市林大机械有限公司）
数显恒温水浴锅：HH-6（国华电器有限公司）
双光束紫外可见分光光度计：TU-1901（北京普析通用仪器有限责任公司）;
电子分析天平：BP211D、BT224S（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）
玻璃仪器：购自重庆医药化玻公司。
1.2材料
对照品：无水葡萄糖（110833-201506），中国食品药品检定研究院。
对照药材：黄精（121341-201705），中国食品药品检定研究院。
供试品：黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精4种炮制品，各备6个批次。
试剂：试验用水为纯化水，无水乙醇、乙醇、正丁醇、石油醚（60-90℃）、乙酸乙酯、甲酸、香草醛、硫酸、蒽酮均为分析纯。
硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂。
2方法与结果
2.1黄精不同炮制品的多糖含量测定
2.1.1标准曲线的绘制
对照品溶液的制备取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每lml中含无水葡萄糖0.33rag）。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml，分别置10ml具塞刻度试管中，各加水至2.0ml，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10分钟，取出，立即置冰水浴中冷却10分钟。取出，以相应试剂为空白。照紫外。可见分光光度法（《中国药典～2015年版通则0401》）在582nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程，A=0.0395C+0.0547，r=0.9996.结果见表1及图1.
结果表明，无水葡萄糖在3.319-19.914ug/ml范围内，线性关系良好。
2.1.2黄精不同炮制品的含量测定
供试品溶液的制备
取60℃干燥至恒重的黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精细粉各约0.25g，精密称定，分别置圆底烧瓶中，各加80%乙醇150ml，置水浴中加热回流1小时，趁热滤过，残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10ml，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150ml，置沸水浴中加热回流1小时，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10ml，合并滤液与洗液，放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。
黄精不同炮制品多糖含量测定 精密量取各供试品溶液lml，分别置10ml具塞干燥试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至2.0ml"起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量（mg），计算，即得。各炮制品作六个批次。结果见表2及图2.
该法为药典2015版收载的方法，稳定可靠，科学简便，故不再做方法学考查。
结果表明，黄精经炮制后，多糖含量降低，多糖含量由高到低分别为：黄精片>九制黄精>酒黄精>制黄精。
2.2黄精不同炮制品的浸出物测定
取黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精供试品各约2g，精密称定，分别置150ml的锥形瓶中，精密加稀乙醇各100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置己干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。各炮制品作六个批次。结果见表3及图3 结果表明，黄精经炮制后，制黄精浸出物降低，酒黄精、九制黄精浸出物升高，浸出物由高到低分别为：九制黄精>酒黄精>黄精片>制黄精。
2.3黄精不同炮制品薄层色谱的比较
分别取黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精粉末各1g，各加70%乙醇20ml，加熱回流1小时，抽滤，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取黄精对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版通则0502）试验，吸取上述溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯-甲酸（5：2：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在1050CN热至斑点显色清晰，得黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精及黄精对照药材薄层色谱，结果见图4
结果表明，黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精薄层色谱与黄精对照药材无明显差异。
3讨论
3.1通过以上实验，对黄精不同炮制品的成分变化作了初步探讨。结果表明：黄精经临方炮制后，多糖含量降低，多糖含量由高到低分别为黄精片>九制黄精>酒黄精>制黄精;同时，制黄精浸出物降低，酒黄精、九制黄精浸出物升高，浸出物由高到低分别为：九制黄精>酒黄精>黄精片>制黄精;薄层色谱表明各炮制品与对照药材无明显差异。初步认为采用蒸制法和用辅料黄酒是确保黄精炮制质量的关键。
3.2目前关于黄精的刺激性作用，普遍认为其中的黏液质是主要成分，黏液质属多糖类物质，黄精经炮制后多糖类含量降低，可能是黏液质被分解的结果。
3.3黄精的药理作用研究多集中在黄精多糖、黄精皂苷及炮制过程中明显增多的5-羟甲基糠醛上。黄精多糖被认为是黄精的主要药效成分，本实验中，炮制后多糖含量下降，这与多个研究报道的结果一致。而又有研究认为，炮制前后的多糖药理作用并没有显著性差异，尽管多糖含量下降，但由于多糖水解成了易于煎出的低聚糖和单糖，才更有利于药效的发挥。目前对黄精炮制增效的机制探讨主要集中在黄精多糖质变和量变方面，而黄精多糖是否就是唯一的或者是最主要的药效成分，以及黄精中的其他成分是否对炮制后药效增强也起到了关键作用，仍然有待于进一步研究。
3.4黄精成分丰富，炮制后其成分及浸出物含量的改变，既有炮制过程中发生化学反应的作用，也有加入辅料炮制促进有效成分溶解的作用。黄精的质量标准需更加全面考虑多个因素，而黄精炮制后，补益作用增强，可能与组成成分改变（包括化学结构改变、有效成分增多、各成分构成比例改变）、成分溶出提高、氨基酸含量增多等有关。因此，有必要对黄精炮制前后的化学成分进行更深入的研究，并结合药理实验以阐明黄精炮制前后减毒增效的作用机制，从而为制定黄精及其炮制品的质量控制体系奠定基础。
致谢：感谢成都新荷花中药饮片公司周静波博士及其团队提供有关实验支撑。
[关键词]黄精;黄精多糖;浸出物;炮制;薏酮-硫酸法;热浸法;薄层色谱法
[中圖分类号]R283 [文献标识码]A [文童编号]2096-5249（2019）14-281-03
黄精为百合科植物滇黄精Polygonatum kingianum Coll。etHemsl、黄精Polygonatum sibiricum Red。或多花黄精Polygonatum cyrtonema Hua的干燥根茎。按形状不同，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。黄精为临床常用补益药，归脾、肺、肾经，其性味甘平，具有补气养阴，健脾润肺，益肾的功效，用于脾胃气虚，体倦乏力，胃阴不足，口干食少，肺虚燥咳，劳嗽咳血，精血不足，腰膝酸软，须发早白，内热消渴等病症。生黄精具有麻味，生品服用时，口舌麻木，刺激咽喉。接触过生黄精或其汁液的皮肤会产生瘙痒的感觉，久闻其生味，有刺目之感，故多炮制后入药。通过炮制，一方面可制其毒副作用，消除麻味，减轻对咽喉的刺激性，糖性变浓烈，口感好，利于服用;另一方面，黄精经炮制后转变药性，利于有效成分积累，可提高黄精的临床疗效，增强药物补脾润肺，益肾的作用。至清末，黄精的炮制方法多达十余种，但以蒸煮法为主，现代的炮制方法中又增加了加辅料蒸等不同的工艺方法。据不完全统计，黄精的临方炮制品多为黄精片（药典）、酒黄精（药典，酒炖法或酒蒸法，每100kg黄精，用黄酒20kg。）、制黄精（四川炮制规范，用黑豆熬取浓汁，浸拌润透心，蒸至内外呈滋润黑色，干燥。每100kg黄精用黑豆10kg）、九制黄精。为了探讨这些炮制方法使黄精的成分发生了什么改变，本实验通过测定黄精不同炮制品中多糖、浸出物含量变化并对其薄层色谱进行比较研究，试探黄精临方炮制的实际意义，为阐明黄精炮制作用机制研究奠定基础。
1试验仪器与材料
1.1仪器
手提式高速粉碎机：DFT-100A（温岭市林大机械有限公司）
数显恒温水浴锅：HH-6（国华电器有限公司）
双光束紫外可见分光光度计：TU-1901（北京普析通用仪器有限责任公司）;
电子分析天平：BP211D、BT224S（赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）
玻璃仪器：购自重庆医药化玻公司。
1.2材料
对照品：无水葡萄糖（110833-201506），中国食品药品检定研究院。
对照药材：黄精（121341-201705），中国食品药品检定研究院。
供试品：黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精4种炮制品，各备6个批次。
试剂：试验用水为纯化水，无水乙醇、乙醇、正丁醇、石油醚（60-90℃）、乙酸乙酯、甲酸、香草醛、硫酸、蒽酮均为分析纯。
硅胶G薄层板：青岛海洋化工厂分厂。
2方法与结果
2.1黄精不同炮制品的多糖含量测定
2.1.1标准曲线的绘制
对照品溶液的制备取105℃干燥至恒重的无水葡萄糖对照品33mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每lml中含无水葡萄糖0.33rag）。
标准曲线的制备
精密量取对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml，分别置10ml具塞刻度试管中，各加水至2.0ml，摇匀，在冰水浴中缓缓滴加0.2%蒽酮-硫酸溶液至刻度，混匀，放冷后置水浴中保温10分钟，取出，立即置冰水浴中冷却10分钟。取出，以相应试剂为空白。照紫外。可见分光光度法（《中国药典～2015年版通则0401》）在582nm波长处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，得线性方程，A=0.0395C+0.0547，r=0.9996.结果见表1及图1.
结果表明，无水葡萄糖在3.319-19.914ug/ml范围内，线性关系良好。
2.1.2黄精不同炮制品的含量测定
供试品溶液的制备
取60℃干燥至恒重的黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精细粉各约0.25g，精密称定，分别置圆底烧瓶中，各加80%乙醇150ml，置水浴中加热回流1小时，趁热滤过，残渣用80%热乙醇洗涤3次，每次10ml，将残渣及滤纸置烧瓶中，加水150ml，置沸水浴中加热回流1小时，趁热滤过，残渣及烧瓶用热水洗涤4次，每次10ml，合并滤液与洗液，放冷，转移至250ml量瓶中，加水至刻度，摇匀。
黄精不同炮制品多糖含量测定 精密量取各供试品溶液lml，分别置10ml具塞干燥试管中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加水至2.0ml"起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含无水葡萄糖的重量（mg），计算，即得。各炮制品作六个批次。结果见表2及图2.
该法为药典2015版收载的方法，稳定可靠，科学简便，故不再做方法学考查。
结果表明，黄精经炮制后，多糖含量降低，多糖含量由高到低分别为：黄精片>九制黄精>酒黄精>制黄精。
2.2黄精不同炮制品的浸出物测定
取黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精供试品各约2g，精密称定，分别置150ml的锥形瓶中，精密加稀乙醇各100ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml，置己干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，计算，即得。各炮制品作六个批次。结果见表3及图3 结果表明，黄精经炮制后，制黄精浸出物降低，酒黄精、九制黄精浸出物升高，浸出物由高到低分别为：九制黄精>酒黄精>黄精片>制黄精。
2.3黄精不同炮制品薄层色谱的比较
分别取黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精粉末各1g，各加70%乙醇20ml，加熱回流1小时，抽滤，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，加正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液。另取黄精对照药材1g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法（《中国药典》2015年版通则0502）试验，吸取上述溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯-甲酸（5：2：0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在1050CN热至斑点显色清晰，得黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精及黄精对照药材薄层色谱，结果见图4
结果表明，黄精片、酒黄精、制黄精、九制黄精薄层色谱与黄精对照药材无明显差异。
3讨论
3.1通过以上实验，对黄精不同炮制品的成分变化作了初步探讨。结果表明：黄精经临方炮制后，多糖含量降低，多糖含量由高到低分别为黄精片>九制黄精>酒黄精>制黄精;同时，制黄精浸出物降低，酒黄精、九制黄精浸出物升高，浸出物由高到低分别为：九制黄精>酒黄精>黄精片>制黄精;薄层色谱表明各炮制品与对照药材无明显差异。初步认为采用蒸制法和用辅料黄酒是确保黄精炮制质量的关键。
3.2目前关于黄精的刺激性作用，普遍认为其中的黏液质是主要成分，黏液质属多糖类物质，黄精经炮制后多糖类含量降低，可能是黏液质被分解的结果。
3.3黄精的药理作用研究多集中在黄精多糖、黄精皂苷及炮制过程中明显增多的5-羟甲基糠醛上。黄精多糖被认为是黄精的主要药效成分，本实验中，炮制后多糖含量下降，这与多个研究报道的结果一致。而又有研究认为，炮制前后的多糖药理作用并没有显著性差异，尽管多糖含量下降，但由于多糖水解成了易于煎出的低聚糖和单糖，才更有利于药效的发挥。目前对黄精炮制增效的机制探讨主要集中在黄精多糖质变和量变方面，而黄精多糖是否就是唯一的或者是最主要的药效成分，以及黄精中的其他成分是否对炮制后药效增强也起到了关键作用，仍然有待于进一步研究。
3.4黄精成分丰富，炮制后其成分及浸出物含量的改变，既有炮制过程中发生化学反应的作用，也有加入辅料炮制促进有效成分溶解的作用。黄精的质量标准需更加全面考虑多个因素，而黄精炮制后，补益作用增强，可能与组成成分改变（包括化学结构改变、有效成分增多、各成分构成比例改变）、成分溶出提高、氨基酸含量增多等有关。因此，有必要对黄精炮制前后的化学成分进行更深入的研究，并结合药理实验以阐明黄精炮制前后减毒增效的作用机制，从而为制定黄精及其炮制品的质量控制体系奠定基础。
致谢：感谢成都新荷花中药饮片公司周静波博士及其团队提供有关实验支撑。