小鼠γ—干扰素真核表达质粒的构建和鉴定

来源 :现代临床医学生物工程学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：elenganse

【摘要】

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目的克隆小鼠γ-干扰素(γ-IFN)基因,构建并鉴定小鼠γ-干扰素真核表达质粒.方法从BALB/c小鼠脾脏提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出小鼠γ-干扰素基因, 分别用EcoRⅠ、BamHⅠ双

【作者】

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胡晓文李建国

【机构】

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中山大学附属第二医院呼吸内科

【出处】

：

现代临床医学生物工程学杂志

【发表日期】

：

2003年6期

【关键词】

：

小鼠 γ—干扰素真核表达质粒构建鉴定定向克隆序列分析 Gamma interferondirect clone Eukarotic expressin

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目的克隆小鼠γ-干扰素(γ-IFN)基因,构建并鉴定小鼠γ-干扰素真核表达质粒.方法从BALB/c小鼠脾脏提取总RNA,用RT-PCR方法扩增出小鼠γ-干扰素基因, 分别用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切扩增片段和pcDNA3.1(-),定向克隆到真核表达质粒pcDNA3.1(-),构建成真核表达质粒pcDNA3.1(-)γ-IFN.转化产物通过PCR扩增筛选,双酶切鉴定;阳性克隆进行序列分析.结果 RT-PCR产物电泳可见一约500bp大小目的片段.PCR和双酶切电泳结果均证实已插入约500bp的γ-IFN

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