人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染细胞系的建立

来源 :第四军医大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:freeboy033
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目的:构建人MCHR2真核表达载体,转染HEK293细胞,建立稳定转染细胞系.方法:采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+),经酶切和PCR鉴定后,脂质体转染法转染HEK293细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,RT-PCR,Western Blot及免疫荧光法检测MCHR2的表达.结果:成功构建了pcDNA3.1-MCHR2真核表达载体并已稳定转入HEK293细胞,建立了稳定转染细胞
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