【摘 要】
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目的 研究骆驼蓬总碱(total alkaloid of harmaline,TAH)通过调节神经细胞自噬促进Tau蛋白的降解作用.方法 完全培养基培养稳定表达绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(green f
【机 构】
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新疆医科大学基础医学院,乌鲁木齐830011;新疆医科大学药学院,乌鲁木齐830011;第一附属医院临床医学研究院,乌鲁木齐830054
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目的 研究骆驼蓬总碱(total alkaloid of harmaline,TAH)通过调节神经细胞自噬促进Tau蛋白的降解作用.方法 完全培养基培养稳定表达绿色荧光蛋白-微管相关蛋白1轻链3(green fluo-rescent protein-microtubule associated protein 1 light chain 3,GFP-LC3)的大鼠肾(normal rat kidney,NRK)细胞、人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y),分成对照组(CT组)、雷帕霉素(rapamycin,Rapa)组和TAH组,利用激光共聚焦显微镜观察自噬体数量的变化,蛋白免疫印迹技术检测自噬底物蛋白(p62/sequestosome-1,P62/SQSTM1)和自噬体标志性蛋白微管相关蛋白1轻链3(microtubule associated protein 1 light chain 3,LC3)LC3-II蛋白表达水平的变化;完全培养基培养表达Tau-绿色荧光蛋白(tau-green fluorescent protein,Tau-GFP)的人胚肾-293(human embryonic kidney-293,HEK-293)细胞,分成对照组(CT组)、模型组(DOX组)和药物组(DOX+TAH组),结合溶酶体标记探针Lyso-track-er Red,利用激光共聚焦显微镜观察Tau-GFP的荧光变化及溶酶体活性的变化,蛋白免疫印迹技术检测Tau-GFP和LC3-II蛋白表达水平的变化.结果 与CT组比较,TAH组细胞中自噬体数目增多,P62蛋白表达水平降低,LC3-II蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);DOX诱导Tau蛋白表达后,与DOX组比较,DOX+TAH组Tau-GFP荧光强度减弱,蛋白表达水平降低,LC3-II蛋白表达水平升高,溶酶体活性增强,差异有统计学意义(P<0.05).结论 TAH可以降解Tau蛋白,并通过诱导神经细胞自噬发挥此作用.
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