论文部分内容阅读
本文首次描述了提取纯化破伤风神经毒素重链N-末端B片段的工作。首先从培养滤液中制备破伤风毒素,通过高压液相层析分离由木瓜蛋白酶裂解毒素产生AB和C片段,AB片段经100mmol/L DTT还原和2mol/L尿素处理后,用离子交换层析Mono Q柱提取分离的A和B片段。柱子用20mmol/L Tris-HC1缓冲液,pH7.6,含2mol/L尿素及1mmol/L DTT平衡和用NaCl线性梯度(0—0.5mol/L)洗脱得到纯化的B片段。在SDSPAGE中纯化的B片段形成单一的蛋白质带,分子量为48000,等电点为7.3和6.7。该片段从AB的收率为50—72%。100μg剂量的B片段仍不能在小鼠中引起任何中毒症状,却能在人工磷脂膜上形成离子通道。文中并讨论了有关离子通道形成对于毒素分子导入到神经末梢细胞的有关机理。