目的:运用噬菌体展示技术筛选能够与Aβ₄₂竞争性结合其受体PirB的小分子多肽,并验证其生物学功能,为以PirB受体为靶点的小分子多肽治疗阿尔茨海默病提供新的依据。方法:以PirB受体为目标蛋白,经过三轮生物淘选,从Ph.D.-7噬菌体随机展示肽库筛选获得高特异性的单克隆噬菌体,ELISA检测分析单克隆噬菌体与PirB的结合能力。提取阳性克隆菌ssDNA,测序翻译,分析比对阳性序列与Aβ₄₂的相似度及疏水轮廓,合成候选多肽。采用MTT检测多肽细胞毒性,利用细胞免疫荧光结合实验验证候选多肽是否和PirB结合。利用链霉素-亲和素结合实验进一步测量候选肽与PirB的结合能力,得到解离常数。采用神经元突起损伤模型探究多肽的体外生物活性。Western Bolt检测PirB下游信号ROCK2,CRMP2,p-CRMP2的表达情况。结果:三轮生物淘选后获得29个阳性克隆,结合ELISA结果选定11个阳性克隆,提取ssDNA,测序翻译,体外合成11条候选肽。经软件分析比对后,其中候选肽P11（命名为P2）与PirB高亲和力的配体Aβ₄₂有三个相同的氨基酸,与Aβ₄₂带同样的电荷,具有较高的相似性,更有可能阻断Aβ₄₂与受体PirB的结合。经过MTT、免疫荧光结合实验及体外神经元损伤模型,对11条候选多肽进行筛选验证发现P2为目标肽,P2可能阻断Aβ₄₂与受体PirB的结合。MTT结果表明P2在16μmol·L^-1浓度范围内都不具备生物毒性。免疫荧光结合实验表明P2结合能力强。细胞荧光共定位实验也表明,P2能够特异性的与PirB结合。链霉素-亲和素结合实验表明,P2与受体PirB特异性结合,解离常数Kd为0.128μmol·L^-1。生物学功能表明,在原代皮质神经元突起损伤模型中P2可拮抗Aβ₄₂介导的突起损伤作用,促进神经突起的再生。WB结果表明,P2降低PirB受体下游蛋白ROCK2,p-CRMP2的表达。结论:成功的从噬菌体随机展示肽库中筛选得到具有生物活性的PirB受体高特异性拮抗肽,命名为P2。P2与受体PirB特异性结合,解离常数Kd为0.128μmol·L^-1,P2能缓解Aβ₄₂引起的神经生长突起抑制作用,促进神经突起再生,其分子机制为降低PirB受体下游信号蛋白ROCK2的表达以及CRMP2蛋白的磷酸化。