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目的
通过同时靶向人类表皮生长因子受体-2(Her-2)和表皮生长因子受体(EGFR)分子的双特异性抗体抑制人胰腺癌细胞PANC-1体内外增殖。
方法通过基因合成获得曲妥珠单抗和西妥昔单抗的基因序列，经重叠聚合酶链反应(PCR)融合成目的基因，构建入表达载体，转化进毕赤酵母X-33进行表达，获得同时靶向Her-2和EGFR的双特异性抗体CT-BiAb；流式检测CT-BiAb对胰腺癌细胞系PANC-1的结合能力；MTT法检测CT-BiAb对PANC-1细胞的增殖抑制；通过流式双染法检测给药后PANC-1细胞的凋亡率；建立PANC-1荷瘤小鼠动物模型，检测CT-BiAb的体内抗肿瘤活性。
结果通过毕赤酵母表达及纯化，获得CT-BiAb，经Western blot鉴定验证了CT-BiAb表达及装配正确。流式细胞术检测CT-BiAb与PANC-1的结合率为50.9%。细胞增殖抑制实验，与PBS组相比，亲本抗体组与CT-BiAb组对PANC-1均有抑制作用，且抑制作用呈浓度依赖性。凋亡实验，CT-BiAb组PANC-1细胞凋亡率[(33.50±7.14)%]高于亲本曲妥珠单抗[(15.86±4.32)%，P＝0.022]，也高于西妥昔单抗组[(18.64±5.71)%，P＝0.048]。移植瘤模型实验，CT-BiAb高剂量组肿瘤抑制率可以达到(73.76±10.21)%，明显优于亲本曲妥珠单抗[(32.55±14.42)%，P＝0.001]，也明显优于西妥昔单抗组[(52.63±8.47)%，P＝0.006]。
结论本文构建了CT-BiAb，其具有良好的体内外抗肿瘤活性，有效地抑制PANC-1的体内外增殖，为抗肿瘤治疗提供了新的思路。