【摘 要】
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应用PCR技术从长春地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪检测到PCV2病毒基因组序列,并以PK15细胞分离获得1株病毒,命名为PCV2-CC12毒株。序列测定结果揭示:CC12毒株的完整基
【机 构】
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吉林大学动物医学学院; 湖南农业大学动物医学院;
【基金项目】
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吉林省高层次创新创业人才引进专项基金资助项目(4305050102Q6);吉林大学国家重点学科学科学术带头人专项基金资助项(4305050102O1)
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应用PCR技术从长春地区疑似断奶仔猪多系统衰竭综合征病猪检测到PCV2病毒基因组序列,并以PK15细胞分离获得1株病毒,命名为PCV2-CC12毒株。序列测定结果揭示:CC12毒株的完整基因组序列为1 767bp,含有2个较大的读码框架,编码病毒复制所需的Rep蛋白和病毒的结构蛋白Cap。核苷酸序列的比对分析发现,CC12株基因组的607位核苷酸存在一个独特的碱基突变(607A>G),导致其编码的Rep蛋白的186位氨基酸由天冬酰胺突变成丝氨酸(N186S)。应用PCR扩增病毒的全基因组序列并将其插入pBluescript II SK载体获得CC12株单拷贝基因组重组质粒,并以此构建了正向双拷贝重组质粒。重组质粒通过脂质体转染PK15细胞后,以RT-PCR、免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)和间接免疫荧光试验(IFA)等方法检测拯救病毒,结果从盲传第8代后的细胞培养物中检测到病毒粒子的存在,表明CC12毒株拯救成功,为进一步研究PCV2病毒的复制机理及致病机理打下基础。
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