【摘 要】
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目的:建立一种测定巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性的高效液相色谱法。方法:以S-甲基-14C-腺苷-甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体,6-硫鸟嘌呤(6-TG)作为反应底物,TPMT催化6-TG生成6-甲
【机 构】
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华中科技大学同济医学院药学院,广州军区武汉总医院临床药理科,广州军区武汉总医院临床药理科,广州军区武汉总医院临床药理科,广州军区武汉总医院临床药理科,广州军区武汉总医院临床药理科,广州军区武汉总医院临
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目的:建立一种测定巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)活性的高效液相色谱法。方法:以S-甲基-14C-腺苷-甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体,6-硫鸟嘌呤(6-TG)作为反应底物,TPMT催化6-TG生成6-甲基硫鸟嘌呤(6-MTG),高氯酸沉淀后进样分析。采用Hypersil BDS C18(250mm×4.6 mm,5μm)柱;流动相为磷酸钾缓冲液-乙腈-四氢呋喃(94:4:2),流速1ml·min-1;荧光检测器激发波长:315 nm,发射波长:390 nm。结果:标准曲线方程为Y=0.093 3X-0.002 2,r=0.999 3,线性范围为7.5～300.0 pmol。日内RSD小于5.0%,日间RSD小于13.0%,高、中、低浓度的平均方法回收率分别为94.42%,99.90%,103.94%,平均提取回收率分别为94.42%,81.85%,91.62%。结论:该法操作简便,回收率稳定,灵敏度高,适于临床常规检测。
Objective: To establish a high performance liquid chromatographic method for the determination of thiopurine methyltransferase (TPMT) activity. Methods: 6-Thioguanine (6-TG) was used as a substrate and S-methyl-14C-adenosyl-methionine (SAM) Thioguanine (6-MTG), perchloric acid precipitation after injection analysis. A Hypersil BDS C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) was used. The mobile phase consisted of potassium phosphate buffer-acetonitrile-tetrahydrofuran (94: 4: 2) with a flow rate of 1 ml · min- Wavelength: 390 nm. Results: The standard curve equation was Y = 0.093 3X-0.002 2, r = 0.999 3, and the linear range was 7.5-300.0 pmol. The average RSD was less than 5.0% and the daytime RSD was less than 13.0%. The average recoveries of high, medium and low concentrations were 94.42%, 99.90% and 103.94%, respectively. The average recoveries were 94.42%, 81.85% and 91.62%, respectively. Conclusion: The method is simple, stable, high sensitivity and suitable for clinical routine testing.
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