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以菜籽油为原料，实验室自制脂肪酶为催化剂，对在低温条件下甲醇与菜籽油进行酯交换反应制备生物柴油的工艺进行了探索研究。通过单因素实验和正交实验，重点考察了醇油摩尔比、酶添加量、反应时间、反应温度和水添加量等因素对酯交换反应的影响。结果表明，反应的最佳优化条件为：醇油摩尔比4：1，酶添加量105U／g，反应温度20℃，反应时间12h，水添加量为油质量的20％。在此条件下，菜籽油的脂肪酸甲酯转化率可达97％左右。