应用聚合酶链反应检测肝脏冰冻及石蜡切片中乙型肝炎病毒DNA的方法、经验和体会

来源 :中华实验和临床病毒学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wspywps110
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本文介绍在应用聚合酶链反应(PCR)检测3例肝脏及石蜡切片中的乙型肝炎病毒DNA(HBV DNA)过程中的具体方法、经验和体会;发现冰冻切片应用酚提法;石蜡切片采用水煮法,可以获得较高质量的DNA。在检测PCR产物时,EB胶中电泳和Southern杂交相比,后者具有更高的特异性和敏感性,故对PCR作结论时,应该以Southern杂交的结果为准。两个引物的浓度必须相等,否则会由于不对称扩增而出现双重扩增带。当PCR产物经Southern杂交后,出现多数额外阳性扩增带时,经提高复性温度和降低模板DNA的浓度来纠正。3例HBV感染的肝组织内均有HBV的S、C和X基因的存在。由于PCR具有高度敏感性,操作过程中必须非常严格,以防污染造成的假阳性。

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