【摘 要】
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为探究犬恶丝虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Di-Serpin)的生物学特性,初步评价重组蛋白(rDi-Serpin)的诊断价值。本研究扩增犬恶丝虫的Di-Serpin基因片段并经原核表达系统表达该蛋白,
【机 构】
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四川农业大学动物医学院/动物寄生虫病研究中心; 成都大熊猫繁育研究基地;
【基金项目】
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成都大熊猫繁育研究基金项目:犬恶丝虫功能基因研究(CPF2014-09)
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为探究犬恶丝虫丝氨酸蛋白酶抑制剂(Di-Serpin)的生物学特性,初步评价重组蛋白(rDi-Serpin)的诊断价值。本研究扩增犬恶丝虫的Di-Serpin基因片段并经原核表达系统表达该蛋白,经western blot和免疫荧光定位分析r Di-Serpin的免疫反应性以及Di-Serpin在虫体的分布;以纯化的r Di-Serpin为包被抗原,通过间接ELISA评价其诊断价值。结果显示,Di-Serpin基因片段共编码121个氨基酸,预测蛋白质分子量为13.56 ku,等电点为5.06,含有一个Serpin结构域;Di-Serpin主要分布于犬恶丝虫(雌虫、雄虫)的表皮层和肠上皮;以其为包被抗原建立的间接ELISA方法,结果显示:该方法的敏感性和特异性检测结果分别为70%(14/20)和70%(35/50)。研究结果表明,犬恶丝虫的Di-Serpin可能为分泌蛋白,在抑制宿主蛋白酶活性,参与抗炎及逃避宿主对虫体的免疫中起重要作用;该蛋白虽有较好的免疫反应性,但其特异性和敏感性均较低,不适合作为犬恶丝虫病的候选诊断抗原。
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