【摘 要】
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目的 探讨miR-27a调控PI3K/AKT/mTOR通路介导的自噬对肺炎链球菌(SP)诱导人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)损伤的影响.方法 用1×108 CFU/mL SP诱导HPAEpiC,在诱导前48 h使用Lipofectamine 3000转染试剂盒分别转染细胞miR-27a-NC(miR-27a-NC组)、miR-27a-inhibitor(miR-27a-inhibitor组)、pcDNA-NC(pcDNA-NC组)、pcDNA-PI3K(pcDNA-PI3K组),共转染细胞miR-27a-
【机 构】
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郑州大学附属儿童医院 河南省儿童医院 郑州儿童医院呼吸科,郑州 450018
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目的 探讨miR-27a调控PI3K/AKT/mTOR通路介导的自噬对肺炎链球菌(SP)诱导人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)损伤的影响.方法 用1×108 CFU/mL SP诱导HPAEpiC,在诱导前48 h使用Lipofectamine 3000转染试剂盒分别转染细胞miR-27a-NC(miR-27a-NC组)、miR-27a-inhibitor(miR-27a-inhibitor组)、pcDNA-NC(pcDNA-NC组)、pcDNA-PI3K(pcDNA-PI3K组),共转染细胞miR-27a-NC和Si-NC(miR-27a-NC+Si-NC组)、miR-27a-inhibitor和Si-NC(miR-27a-inhibitor+Si-NC组)、miR-27a-NC和Si-PI3K(miR-27a-NC+Si-PI3K组)、miR-27a-inhibitor和Si-PI3K(miR-27a-inhibitor+Si-PI3K组).另取非诱导细胞为对照组,诱导且未转染细胞为诱导组.qRT-PCR检测正常HPAEpiC和SP诱导的HPAEpiC中miR-27a表达水平;生物信息学预测和双荧光素酶验证miR-27a和PI3K靶向关系;CCK-8法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA法检测细胞上清液中IL-6和IL-10含量;Western blot检测细胞中PI3K、Beclin1蛋白表达水平、LC3-II/I比值以及AKT、mTOR蛋白磷酸化水平.结果 与对照组相比,诱导组细胞miR-27a表达水平、细胞凋亡率、IL-6含量、Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值升高(P<0.05),PI3K蛋白表达水平、细胞增殖率、IL-10含量、AKT、mTOR蛋白磷酸化水平降低(P<0.05).与miR-27a-NC组相比,miR-27a-inhibitor组细胞miR-27a表达水平、细胞凋亡率、IL-6含量、Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值降低(P<0.05),细胞增殖率、IL-10含量、AKT、mTOR蛋白磷酸化水平升高(P<0.05).与pcDNA-NC组相比,pcDNA-PI3K组细胞凋亡率、IL-6含量、Beclin1蛋白表达水平和LC3-II/I比值降低(P<0.05),PI3K蛋白表达水平、细胞增殖率、IL-10含量、AKT、mTOR蛋白磷酸化水平升高(P<0.05).结论 在SP诱导HPAEpiC损伤过程中,miR-27a能够靶向抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进自噬,而抑制miR-27a可激活PI3K/AKT/mTOR信号通路,抑制自噬,缓解SP所致HPAEpiC损伤.
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