为建立一种快速、灵敏检测鸡毒支原体（MG）的方法，本研究根据GenBank中登录的MK984197.1，针对PAPV基因的保守序列设计了1对特异性引物探针，将PCR扩增后的PAPV基因克隆至pMD19-T载体，以构建出的重组质粒作为标准阳性质粒标准品，建立了鸡毒支原体TaqMan探针荧光定量PCR检测方法，并对该方法的敏感性、特异性和重复性等进行了优化与验证。结果显示，Ct值与标准模板在0.53×108～0.53×103 copies/μL范围内呈良好的线性关系，相关系数(R2)为0.998，线性方程的斜率为-3.219，最低检测限度为 0.53×102 copies/μL；经组内和组间重复试验，两者变异系数均小于3%，表明该方法具有良好的稳定性和可重复性；与鸡滑液囊支原体（MS）、火鸡支原体（MM）等均无交叉反应，表明该方法具有很好的特异性；利用所建立的MG-TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法对部分地区抽检的60份临床样品进行检测，该方法较普通PCR方法的检出率更高。上述结果表明，本研究成功建立了MG-TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法，可实现对MG的快速灵敏诊断。