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目的 建立检测HBV共价闭合环状DNA( cccDNA)的巢式-荧光定量PCR法，检测外周血单核细胞( PBMC)及骨髓单核细胞(MMNC)中cccDNA。方法 根据HBV cccDNA与松弛结构DNA(rcDNA)结构上的差异，设计2对跨缺口的特异性引物及下游的特异性TaqMan探针。根据Mung Bean Nuclease对rcDNA与cccDNA作用的不同，使cccDNA扩增而使rcDNA降解，分别用外引物及内引物进行PCR反应，再用荧光探针进行实时荧光定量PCR，根据阳性参照物，计算出检测标本定量值。结果 成功建立了HBV cccDNA巢式-荧光定量PCR的检测方法，线性范围为5.0× 10２～3.9×107拷贝/ml。用上述方法检测25例慢乙肝及肝硬化血清HBV DNA阳性患者外周血单核细胞中cccDNA，7例骨髓单核细胞中cccDNA，21例健康献血者外周血单核细胞中cccDNA，骨髓标本中有3例cccDNA阳性，25例外周血标本中有9例cccDNA阳性。结论 巢式-荧光定量PCR法可检测乙肝患者PBMC及MMNC中的HBVcccDNA含量。PBMC及MMNC中可检测到HBVcccDNA.