【摘 要】
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目的 探讨不同保存时间手工血小板中外泌体浓度变化及其对凝血功能的影响。方法 等体积分装血小板，（22±2）℃保存0、3、5 d（D 0、D 3、D 5）后，超速离心法提取血小板外泌体；采用Western blot、透射电子显微镜、纳米流式分析仪对所提外泌体进行表征鉴定。使用纳米流式分析仪检测其颗粒浓度。取不同保存时间血小板外泌体至人新鲜血浆中，全自动凝血分析仪检测血浆凝血酶原时间（PT）、活化部分
【基金项目】
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中国医学科学院中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金（编号：2018PT32016）； 四川省国际科技创新合作/港澳台科技创新合作项目（编号：2020YFH0024）；
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目的 探讨不同保存时间手工血小板中外泌体浓度变化及其对凝血功能的影响。方法 等体积分装血小板，（22±2）℃保存0、3、5 d（D 0、D 3、D 5）后，超速离心法提取血小板外泌体；采用Western blot、透射电子显微镜、纳米流式分析仪对所提外泌体进行表征鉴定。使用纳米流式分析仪检测其颗粒浓度。取不同保存时间血小板外泌体至人新鲜血浆中，全自动凝血分析仪检测血浆凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）。通过Western blot实验进行凝血因子VII含量测定。取不同保存时间血小板外泌体至人新鲜全血中，血栓弹力图仪检测外泌体对全血凝血指标的影响。结果 鉴定结果显示外泌体免疫标志物TSG 101、CD 9特异性表达；所提外泌体呈现双层膜、类杯状结构；其粒径多为60～80 nm之间。D 0、D 3、D 5外泌体浓度分别为（13.86±7.93）×1012、（23.69±12.80）×1012、（45.81±25.87）×1012个/L。与D 0相比，D 3、D 5外泌体浓度显著增加（P＜0.01）,分别为1.8倍、4.0倍。与对照组相比，D 0与D 5外泌体分别可使PT减小[（0.16±0.15） s,P＜0.01]、[（0.36±0.18） s,P＜0.001];D 0与D 5外泌体分别可使APTT减小[（1.11±1.21） s,P＜0.05]、[（2.10±1.14）s,P＜0.001]。凝血因子Ⅶ定量实验结果显示其在D 0、D 5外泌体中含量差异有统计学意义（P＜0.05）。血栓弹力图实验结果显示对照组、D 0、 D 5外泌体作用于全血后其凝血时间R值分别为（5.46±0.90）min、（5.00±0.67）min、（4.38±1.00） min, D 5组与对照组、D 0组差异有统计学意义（P＜0.05）,提示外泌体具有一定的促凝作用。结论 随着保存时间延长，手工血小板中外泌体浓度显著增加且外泌体的促凝作用显著增强，血小板保存期间产生的外泌体可能通过凝血因子Ⅶ参与促凝过程。
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