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目的
探讨B7-H3分子对不同活化状态T淋巴细胞增殖和相关细胞因子分泌的影响。
方法采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(PBMC)并从中分选纯T细胞,体外给予CD3/CD28单抗共刺激培养,采用流式细胞分析技术观察不同刺激时间点T细胞表型CD28和CTLA-4的变化,分析T细胞活化状态。在此基础上,于CD3/CD28单抗预刺激第0、1、2、3、4天加入人B7-H3-Fc融合蛋白及同型对照Hu-Fc融合蛋白混合共培养,采用CCK-8法检测各组T淋巴细胞增殖情况;ELISA法检测细胞因子(IL-2、IL-10及IFN-γ)分泌水平,分析不同活化状态T细胞接受B7-H3信号刺激后是否产生不同免疫应答。
结果在静息状态下,B7-H3信号可以显著抑制T细胞分泌IL-2和IL-10,对IFN-γ分泌则无显著影响;随着T细胞活化,B7-H3信号可显著促进T细胞分泌IL-2和IFN-γ,对IL-10分泌则无显著影响。细胞增殖实验结果显示B7-H3分子可抑制PBMCs中T细胞的体外增殖,对纯T细胞则无显著影响。
结论B7-H3分子对T细胞免疫功能的调节可随T细胞活化状态不同而改变。