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摘 要：目的：观察灯盏花素治疗新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）的临床疗效并探讨其治疗的作用机制。方法：将60例患儿随机分为灯盏花素治疗组和对照组各30例，治疗组静脉输注灯盏花素，两组同时给予丹参、胞二磷胆碱静脉输注，共14d。观察两组临床疗效及起病第4、7、14天时血清C反应蛋白（CRP）及可溶性黏附分子（sICAM-1）的变化，并与健康对照组比较。结果：患儿血清CRP水平较健康对照组明显增高，治疗组血清CRP水平在第7、14天较对照组明显降低(P<0.05)，治疗组血清sICAM-1浓度亦明显低于对照组(P<0.05)，治疗中未见明显不良反应。结论：灯盏花素治疗HIE时可通过降低CRP，阻断白细胞与血管内皮细胞黏附、抑制ICAM-1表达，从而减轻脑缺血组织的炎症反应，改善预后。
关键词：小儿脑病；脑缺氧；脑缺血；灯盏花素；C反应蛋白；可溶性黏附分子
中图分类号：R722.1文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）02-0024-02
围产期缺氧窒息后引起的缺氧缺血性脑病严重威胁着新生儿的生命健康，是我国伤残儿童重要病因之一。本研究应用灯盏花素治疗新生儿缺氧缺血性脑病，观察治疗前后血清CRP及sICAM-1水平，进一步证实新生儿缺氧缺血性脑病病变基础主要为C反应蛋白（CRP）及血管内皮细胞间黏附分子(ICAM)所介导的炎性反应［1］，探讨灯盏花素治疗新生儿缺氧缺血性脑病的有效作用机制，验证其临床疗效，为灯盏花素治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床应用提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 临床资料
HIE组为我科2007年5月—2008年10月间收治住院的60例患儿，其中男32例，女28例，胎龄为37～42周，出生体重为2 500～4 000g，均有窒息史。根据意识障碍、肌张力改变、原始反射异常、惊厥等临床表现及CT检查结果分为轻度28例，中度25例，重度7例。HIE诊断符合2004年长沙会议制订的《新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准》。健康对照组为本院产科同期出生的足月正常新生儿30例，男16例，女14例；出生体重为2500～4000g。
1.2 治疗方法
患儿均予胞二磷胆碱(江苏吴中医药集团有限公司第六制药厂生产，批号为国药准字1119993174)，发病后即应用(颅内出血量大的除外)(100～125)mg/d，加入5％葡萄糖液50mL于2h内静脉滴注完毕，连用14d。复方丹参注射液（河北天成药业有限公司生产，批号为国药准字Z3021388)在发病后12～48h内使用。首次2mL／kg加入10％葡萄糖液10倍稀释，使用输液泵匀速静脉滴注持续8～10h，以后按0.5mL/kg间隔8h使用，疗程14d。两组均一般对症处理，颅高压者给予甘露醇脱水等。治疗组在此基础上加灯盏花素注射液（昆明龙津制药有限公司生产）4mg，连用14d。
1.3 血清CRP的检测
HIE患儿于入院第4、7、14天时分别抽取静脉血2mL置于含有0.2mL依地酸(EDTA)抗凝液管中，静置30min后离心。分离血清并将其储存于-70℃冰箱待用。采用Dade-Behring Pros Spec全自动特定蛋白分析系统， 以放射免疫比浊法检测CP系统。采用6点定标方式建立标准曲线储存于仪器中，最低检测底线为 0.15mg/L。系统自行对标本进行1∶20稀释后检测。若检测结果>5mg/L，系统自动对标本进行再稀释后复查。所需检测试剂采用Dade-Behring公司提供的Dade-Behnng试剂盒。
1.4 血清sICAM-1测定
采用双抗体夹心ELISA法。试剂盒购自深圳晶美生物制品公司。血清标本1∶100稀释，鼠抗人sICAM-l单抗包被，HRP-OPD系统显色。样品设复孔，待测样品盒标准样品的变异系数低于15％，通过与标准曲线的比较确定待测样品的sICAM-1浓度。分别测定患儿第4、7、14d的sICAM-1浓度。
1.5 统计学处理
计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用t检验。
2 结果
2.1 血清CRP水平（见表1）
灯盏花素治疗组和对照组第4、7、1d4天血清CRP水平均高于健康对照组(P<0.01);治疗组第7、14天血清CRP水平较对照组均出现明显降低(P<0.05)。
2.2 血清sICAM-1水平（见表2）
治疗组和对照组第4d血清sICAM-1浓度均升高，与健康对照组比较有显著性差异(P<0.05)；但治疗组血清sICAM-1浓度低于对照组(P<0.05)。第7天两组血清sICAM-1浓度均开始下降，治疗组下降较为显著，与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。第14天两组患儿血清sICAM-1浓度进一步下降，治疗组与健康对照组相比差异无显著性(P>0.05)；而对照组与健康对照组相比仍有显著性差异(P<0.01)。
2.3 安全性
未见临床应用不良反应。
3 讨论
近年来一系列研究表明CRP是缺血性脑损伤炎症的敏感指标之一，是缺血性脑血管病的独立危险因素之一。CRP是一种非特异性急性时相蛋白，当组织损伤、缺血缺氧发生时，其血清浓度在6～8h开始升高，24～48h达到峰值，可升高达平时的100～1 000倍［2］。本研究结果显示，灯盏花素治疗组血清CRP水平较对照组明显降低(P<0.05)，且未见临床应用不良反应，提示灯盏花素治疗HIE可降低血清CRP水平，抑制急性脑缺血缺氧后的血管炎性反应，有效改善脑缺血缺氧所致的神经功能障碍。中药注射用灯盏花素是从灯盏花中分离出的一类黄酮类成分，主要含灯盏乙素(4，5，6-三羟基黄酮-7葡萄糖醛酸苷)。灯盏乙素能抑制细胞缺血缺氧时所致蛋白激酶C(PKC)的过度激活或位移激活。PKC的过度激活或位移激活能引发细胞外兴奋性氨基酸堆积，氧自由基生成增多，细胞内钙超载，ADP及5-羟色胺释放，从而导致血栓形成、神经细胞凋亡及炎性反应［3，4］。灯盏花素可降低患者血清CRP水平，从而抑制HIE后的血管炎性反应。
在HIE发病过程中，ICAM-1介导外周血白细胞向缺血区聚集、浸润，一方面机械性堵塞微循环通道，影响组织的血液供应；另一方面进入组织内活化的白细胞可释放大量的氧自由基和白三烯、细胞因子等血管活性物质，损害局部血管，直接破坏脑细胞和引起神经元的损害加重。ICAM-1属于免疫球蛋白超家族成员，其主要通过与白细胞表面的LFA-1和Mac-1分子结合，介导白细胞与血管内皮细胞的黏附及白细胞穿出血管壁而发挥生物学活性。ICAM-1从血管内皮表面脱落后成为可溶性ICAM-1(sICAM-1)，故检测sICAM-1的水平可以准确反映ICAM-1在血管内皮细胞的表达水平。因此，ICAM-1介导的脑组织一系列病理改变近年来被认为是HIE的重要原因［5，6］。HIE患儿血清sICAM-1浓度明显高于健康对照组，这一现象与缺血性脑损伤血管内皮细胞ICAM-1表达增强，血管内皮细胞和白细胞黏附增强是一致的。患儿起病24h内血清sICAM-1浓度迅速升高，第4d最高，然后开始下降，第14d逐渐接近正常水平。sICAM-1变化过程的时间规律与脑缺血炎性反应程度变化的时间规律基本一致。监测血清中sICAM-1浓度能够较准确地反映缺血性脑损伤后炎性反应介导的脑损伤程度和炎性反应的过程。本研究中灯盏花素治疗组患儿第4、7天血清sICAM-1浓度低于对照组(P<0.05)，可认为灯盏花素对抗HIE患儿血管内皮细胞ICAM-1表达增强和白细胞黏附增强。随着病程的发展sICAM-1浓度可逐渐降低，但灯盏花素可以缩短这一进程，减少缺血后脑组织神经元的损害程度。
总之，灯盏花素可降低患儿血清CRP及sICAM-1水平，抑制脑缺血组织的炎性反应，改善预后，且灯盏花素治疗安全有效。
参考文献：
［1］ 吴平．新生儿缺氧缺血性脑病的发病机理及治疗进展［J］．国际医药卫生导报，2003，9(2-3)：75.
［2］ Torres JL， Ridker PM．Clinical use of high-sensitivity C-reactive protein or the prediction of adverse cardiovascular events［J］．Curr Opin Cardiol， 2003， 18(6):471.
［3］ 彭海东，涂晋文，田俊．灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后脑含水量和脑组织钙含量的影响［J］.湖北中医学院学报，2002，4(3)：22-24.
［4］ 帅杰.蛋白激酶C抑制剂对缺血再灌注海马CA1区迟发性神经元死亡的作用研究［J］．脑与神经疾病杂志，2004，12(6)：407-409.
［5］ 成登菊，秦桂秀，张小莉.新生儿缺氧缺血性脑病血清中可溶性细胞间黏附分子1及P选择素含量的变化及其临床意义［J］. 中华围产医学杂志，2006，5(9)：199-200.
［6］ 宁双飞.可溶性细胞因子受体及可溶性黏附分子［J］．国外医学免疫学分册，2003，26：57-60.
（责任编辑：姜付平）
关键词：小儿脑病；脑缺氧；脑缺血；灯盏花素；C反应蛋白；可溶性黏附分子
中图分类号：R722.1文献标识码：A文章编号：1673-2197（2009）02-0024-02
围产期缺氧窒息后引起的缺氧缺血性脑病严重威胁着新生儿的生命健康，是我国伤残儿童重要病因之一。本研究应用灯盏花素治疗新生儿缺氧缺血性脑病，观察治疗前后血清CRP及sICAM-1水平，进一步证实新生儿缺氧缺血性脑病病变基础主要为C反应蛋白（CRP）及血管内皮细胞间黏附分子(ICAM)所介导的炎性反应［1］，探讨灯盏花素治疗新生儿缺氧缺血性脑病的有效作用机制，验证其临床疗效，为灯盏花素治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床应用提供理论依据。
1 资料与方法
1.1 临床资料
HIE组为我科2007年5月—2008年10月间收治住院的60例患儿，其中男32例，女28例，胎龄为37～42周，出生体重为2 500～4 000g，均有窒息史。根据意识障碍、肌张力改变、原始反射异常、惊厥等临床表现及CT检查结果分为轻度28例，中度25例，重度7例。HIE诊断符合2004年长沙会议制订的《新生儿缺氧缺血性脑病诊断标准》。健康对照组为本院产科同期出生的足月正常新生儿30例，男16例，女14例；出生体重为2500～4000g。
1.2 治疗方法
患儿均予胞二磷胆碱(江苏吴中医药集团有限公司第六制药厂生产，批号为国药准字1119993174)，发病后即应用(颅内出血量大的除外)(100～125)mg/d，加入5％葡萄糖液50mL于2h内静脉滴注完毕，连用14d。复方丹参注射液（河北天成药业有限公司生产，批号为国药准字Z3021388)在发病后12～48h内使用。首次2mL／kg加入10％葡萄糖液10倍稀释，使用输液泵匀速静脉滴注持续8～10h，以后按0.5mL/kg间隔8h使用，疗程14d。两组均一般对症处理，颅高压者给予甘露醇脱水等。治疗组在此基础上加灯盏花素注射液（昆明龙津制药有限公司生产）4mg，连用14d。
1.3 血清CRP的检测
HIE患儿于入院第4、7、14天时分别抽取静脉血2mL置于含有0.2mL依地酸(EDTA)抗凝液管中，静置30min后离心。分离血清并将其储存于-70℃冰箱待用。采用Dade-Behring Pros Spec全自动特定蛋白分析系统， 以放射免疫比浊法检测CP系统。采用6点定标方式建立标准曲线储存于仪器中，最低检测底线为 0.15mg/L。系统自行对标本进行1∶20稀释后检测。若检测结果>5mg/L，系统自动对标本进行再稀释后复查。所需检测试剂采用Dade-Behring公司提供的Dade-Behnng试剂盒。
1.4 血清sICAM-1测定
采用双抗体夹心ELISA法。试剂盒购自深圳晶美生物制品公司。血清标本1∶100稀释，鼠抗人sICAM-l单抗包被，HRP-OPD系统显色。样品设复孔，待测样品盒标准样品的变异系数低于15％，通过与标准曲线的比较确定待测样品的sICAM-1浓度。分别测定患儿第4、7、14d的sICAM-1浓度。
1.5 统计学处理
计量资料以均数±标准差(±s)表示，采用t检验。
2 结果
2.1 血清CRP水平（见表1）
灯盏花素治疗组和对照组第4、7、1d4天血清CRP水平均高于健康对照组(P<0.01);治疗组第7、14天血清CRP水平较对照组均出现明显降低(P<0.05)。
2.2 血清sICAM-1水平（见表2）
治疗组和对照组第4d血清sICAM-1浓度均升高，与健康对照组比较有显著性差异(P<0.05)；但治疗组血清sICAM-1浓度低于对照组(P<0.05)。第7天两组血清sICAM-1浓度均开始下降，治疗组下降较为显著，与对照组比较有显著性差异(P<0.05)。第14天两组患儿血清sICAM-1浓度进一步下降，治疗组与健康对照组相比差异无显著性(P>0.05)；而对照组与健康对照组相比仍有显著性差异(P<0.01)。
2.3 安全性
未见临床应用不良反应。
3 讨论
近年来一系列研究表明CRP是缺血性脑损伤炎症的敏感指标之一，是缺血性脑血管病的独立危险因素之一。CRP是一种非特异性急性时相蛋白，当组织损伤、缺血缺氧发生时，其血清浓度在6～8h开始升高，24～48h达到峰值，可升高达平时的100～1 000倍［2］。本研究结果显示，灯盏花素治疗组血清CRP水平较对照组明显降低(P<0.05)，且未见临床应用不良反应，提示灯盏花素治疗HIE可降低血清CRP水平，抑制急性脑缺血缺氧后的血管炎性反应，有效改善脑缺血缺氧所致的神经功能障碍。中药注射用灯盏花素是从灯盏花中分离出的一类黄酮类成分，主要含灯盏乙素(4，5，6-三羟基黄酮-7葡萄糖醛酸苷)。灯盏乙素能抑制细胞缺血缺氧时所致蛋白激酶C(PKC)的过度激活或位移激活。PKC的过度激活或位移激活能引发细胞外兴奋性氨基酸堆积，氧自由基生成增多，细胞内钙超载，ADP及5-羟色胺释放，从而导致血栓形成、神经细胞凋亡及炎性反应［3，4］。灯盏花素可降低患者血清CRP水平，从而抑制HIE后的血管炎性反应。
在HIE发病过程中，ICAM-1介导外周血白细胞向缺血区聚集、浸润，一方面机械性堵塞微循环通道，影响组织的血液供应；另一方面进入组织内活化的白细胞可释放大量的氧自由基和白三烯、细胞因子等血管活性物质，损害局部血管，直接破坏脑细胞和引起神经元的损害加重。ICAM-1属于免疫球蛋白超家族成员，其主要通过与白细胞表面的LFA-1和Mac-1分子结合，介导白细胞与血管内皮细胞的黏附及白细胞穿出血管壁而发挥生物学活性。ICAM-1从血管内皮表面脱落后成为可溶性ICAM-1(sICAM-1)，故检测sICAM-1的水平可以准确反映ICAM-1在血管内皮细胞的表达水平。因此，ICAM-1介导的脑组织一系列病理改变近年来被认为是HIE的重要原因［5，6］。HIE患儿血清sICAM-1浓度明显高于健康对照组，这一现象与缺血性脑损伤血管内皮细胞ICAM-1表达增强，血管内皮细胞和白细胞黏附增强是一致的。患儿起病24h内血清sICAM-1浓度迅速升高，第4d最高，然后开始下降，第14d逐渐接近正常水平。sICAM-1变化过程的时间规律与脑缺血炎性反应程度变化的时间规律基本一致。监测血清中sICAM-1浓度能够较准确地反映缺血性脑损伤后炎性反应介导的脑损伤程度和炎性反应的过程。本研究中灯盏花素治疗组患儿第4、7天血清sICAM-1浓度低于对照组(P<0.05)，可认为灯盏花素对抗HIE患儿血管内皮细胞ICAM-1表达增强和白细胞黏附增强。随着病程的发展sICAM-1浓度可逐渐降低，但灯盏花素可以缩短这一进程，减少缺血后脑组织神经元的损害程度。
总之，灯盏花素可降低患儿血清CRP及sICAM-1水平，抑制脑缺血组织的炎性反应，改善预后，且灯盏花素治疗安全有效。
参考文献：
［1］ 吴平．新生儿缺氧缺血性脑病的发病机理及治疗进展［J］．国际医药卫生导报，2003，9(2-3)：75.
［2］ Torres JL， Ridker PM．Clinical use of high-sensitivity C-reactive protein or the prediction of adverse cardiovascular events［J］．Curr Opin Cardiol， 2003， 18(6):471.
［3］ 彭海东，涂晋文，田俊．灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注后脑含水量和脑组织钙含量的影响［J］.湖北中医学院学报，2002，4(3)：22-24.
［4］ 帅杰.蛋白激酶C抑制剂对缺血再灌注海马CA1区迟发性神经元死亡的作用研究［J］．脑与神经疾病杂志，2004，12(6)：407-409.
［5］ 成登菊，秦桂秀，张小莉.新生儿缺氧缺血性脑病血清中可溶性细胞间黏附分子1及P选择素含量的变化及其临床意义［J］. 中华围产医学杂志，2006，5(9)：199-200.
［6］ 宁双飞.可溶性细胞因子受体及可溶性黏附分子［J］．国外医学免疫学分册，2003，26：57-60.
（责任编辑：姜付平）