【摘 要】
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目的 观察Caspase-3和Caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤((IRI)的保护作用.方法 分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属同济医院器官移植研究所,华中科技大学同济医学院附属同济医院综合医疗科
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目的 观察Caspase-3和Caspase-8基因沉默对大鼠肝脏缺血再灌注损伤((IRI)的保护作用.方法 分别构建针对大鼠caspase-3和caspase-8基因的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体.肝脏IRI前48 h经门静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、空载体或Caspase-3和Caspase-8shRNA,实验随机分为4组,假手术组、PBS组、空载体组和shRNA组.阻断大鼠70%入肝血流40min,再灌注6、12、24 h、3、5、7 d检测血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)水平,肝组织Caspase-3和Cmpase-8 mRNA的表达,Caspase-3和Caspase-8蛋白活性,细胞凋亡情况,丙二醛(MDA)以及超氧化物岐化酶(SOD)的含量.结果 与PBS组和空载体组比较,shRNA组再灌注6、12、24 h、3、5 d血清ALT和AST水平显著降低(P＜0.05),Caspase-3和Caspase-8 mRNA水平、Caspase-3和caspase-8蛋白活性(Cmpme-3活性:0.18±0.03比0.36±0.03和0.38±0.02,P＜0.05;caspase-8活性:0.16±0.03比0.32±0.02和0.34±0.03,P＜0.05)、肝细胞凋亡指数[(22.46±3.25)%比(35.24±2.33)%和(37.36±2.51)%,P＜0.05]和肝组织中MDA含量[(76.2±15.3)比(123.5±12.4)、(136.7±13.6)nmol/mg,P＜0.05)显著降低,SOD活性显著升高[(24.1±3.2)比(12.2±3.1)、(11.4±2.9)U/mg,P＜0.05].结论 Caspase-3和Caspase-8基因沉默可以抑制细胞凋亡的发生,从而起到保护肝脏IRI的作用.
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