东海原甲藻线粒体细胞色素b(Cytb)基因的定量检测

来源 :中国海洋大学学报:自然科学版 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ARMYUN1981
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建立了检测东海原甲藻线粒体细胞色素b(Cytb)基因mRNA含量的实时荧光定量PCR方法。以甲藻Cytb基因的简并引物扩增得到984bp长的东海原甲藻Cytb基因片段,经克隆、测序,制备并纯化质粒。以光度法测定质粒浓度并作为标准品。对上述基因片段,利用PRIMEREXPRESS3.0设计引物,以梯度稀释的质粒标准品进行定量PCR反应,以SYBRGreenI为荧光染料。制作标准曲线,得到基因拷贝数X与Ct值的关系为:Ct=-3.50lgX+39.35(相关系数r为0.999)。通过对不同生长时期的东海原甲藻
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