刚地弓形虫TgPH1蛋白的重组表达及其与磷脂酰肌醇结合性的鉴定

来源 :中国热带医学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:youyou306
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的 鉴定重组刚地弓形虫TgPH1蛋白与磷脂酰肌醇在体外的相互结合作用.方法 提取刚地弓形虫总RNA,经RT-PCR扩增TgPH1基因编码序列.扩增产物连接人原核表达载体pGEX-4T-1中得到载体pGEX-TgPH1.同时通过基因定点突变获得载体pGEX-TgPH1R37H.将测序正确的以上两种载体分别转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)并用IPTG诱导表达;SDS-PAGE结合考马斯亮蓝染色检测表达产物.重组蛋白经亲和层析纯化后,利用PIP Strips脂质膜免疫印迹试验检测重组蛋白与不同磷脂酰肌醇的结合.结果 经IPTG诱导4h后,具有载体pGEX-TgPH1或pGEX-TgPH1R37H的菌株,在相对分子量接近40 kD处出现一条清晰的外源蛋白条带.纯化的重组GST-Tg-PH1蛋白能与PI3P和PI(3,5)P2特异性结合;而其相应的突变体GST-TgPH1R37H蛋白并不与膜上的任何磷脂酰肌醇分子相结合.结论 本研究获得了弓形虫PH1全长重组蛋白,并鉴定了其与磷脂酰肌醇在体外的相互结合作用;同时表明TgPH1蛋白中R37位碱性氨基酸残基对其与磷脂酰肌醇的识别和结合过程中起着关键性的作用.本研究为进一步探索具有PH功能域的蛋白及与不同磷脂酰肌醇相互作用的分子机理研究奠定了基础.
其他文献
Stone建筑设备公司推出了动力强劲,性能优良的Phino 66X振动压路机,其整机质量为10t,结合Phino43和53型压路机的设计,具有大型压路机的优良性能,却只有5t压路机的价格.该机配
1996年以来共行肛肠病手术486例,其中骶管麻醉术后排尿困难151例,现报告如下.rn临床资料:男302例,女184例;年龄15~70岁.痔切扎术321例,肛瘘切除术和挂线术68例,肛旁脓肿切开引
采用杭州大力神有限公司生产的ZZ-Ⅱ500型肛肠综合治疗仪,治疗各种肛肠病470例,治疗效果满意,现报告如下.
该文从挂篮荷载计算、施工流程、支座及临时固结施工、挂篮安装及试验、合拢段施工、模板制作安装、钢筋安装、混凝土的浇筑及养生、测量监控等方面人手,介绍了S226海滨大桥
对100例肛肠病手术病人采用2%利多卡因、0.75%布比卡因混合液骶管阻滞麻醉,效果满意,现报告如下.rn临床资料:本组男55例,女45例;年龄16~65岁.高位复杂性肛瘘30例,低位肛瘘10例
该文从挂篮荷载计算、施工流程、支座及临时固结施工、挂篮安装及试验、合拢段施工、模板制作安装、钢筋安装、混凝土的浇筑及养生、测量监控等方面人手,介绍了S226海滨大桥
采用甘露醇导泻的方法来代替肥皂水灌肠做肛肠疾病手术前肠道准备,简便易行,现介绍如下.rn对象与方法:肛肠疾病(痔、肛瘘、肛裂等)20例,随机分为口服甘露醇组和肥皂水灌肠组,
对50例环状混合痔手术中分别施行不同方式的内括约肌切断术,取得了良好效果,现报告如下.rn临床资料:本组男21例,女29例;年龄35~72岁.单纯环状混合痔12例,伴随肛裂、直肠脱垂,
目的探讨个性化干预策略对预防脊柱骨折患者呼吸机相关性肺炎(VAP)的影响。方法选取2015年2月—2016年2月入住ICU行有创机械通气、时间超过48h的患者86例,分对照组(常规护理4