【摘 要】
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目的:研究白细胞介素1Ⅱ型受体(IL-1RII)和白细胞介素1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)重组质粒对大鼠实验性自身免疫性心肌炎(EAM)的作用及其机制.方法:构建体内导入用重组质粒pCAGG
【机 构】
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厦门大学附属翔安医院老年病科,福建厦门361100;厦门大学附属心血管病医院,福建厦门361014;厦门大学附属心血管病医院,福建厦门361014;复旦大学附属中山医院厦门医院,福建厦门361015;
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目的:研究白细胞介素1Ⅱ型受体(IL-1RII)和白细胞介素1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)重组质粒对大鼠实验性自身免疫性心肌炎(EAM)的作用及其机制.方法:构建体内导入用重组质粒pCAGGS-IL-1RII和pCAGGS-IL-1RAcP,并以pCAGGS-SP(signal peptide)作为对照质粒.将雄性Lewis大鼠分成4组:对照(control)组(未免疫未注射质粒的大鼠,n=5)、EAM+SP组(免疫的大鼠尾静脉注射对照质粒,n=9)、EAM+IL-1RII组(免疫的大鼠尾静脉注射IL-1RII质粒,n=8)和EAM+IL-1RII+IL-1RAcP组(免疫的大鼠尾静脉注射IL-1RII和IL-1RAcP质粒,n=7).第0天免疫大鼠造模;第6天应用流体动力学方法尾静脉注射重组质粒;第17天处死大鼠进行疗效评估,评估指标包括组织病理学、心脏彩超检测、心脏重量/体重比值、心肌中心衰标志物心房钠尿肽(ANP)和脑钠尿肽(BNP)及炎症因子的表达.构建体外细胞转染用重组质粒pUC19-IL-1RII-actin和pUC19-IL-1RAcP-tub,转染入Cos7细胞获得培养上清液,将含有IL-1RII和IL-1RAcP的培养上清液加至脂多糖(LPS)诱导的H9c2细胞中,RT-qPCR检测炎症因子的表达变化.将构建的重组质粒pEGFP-IL-1RII-actin和pEGFP-IL-1RAcP-tub转染入Cos7细胞,免疫共沉淀(Co-IP)检测目的蛋白的形成.结果:与EAM+SP组相比,EAM+IL-1RII组和EAM+IL-1RII+IL-1RAcP组大鼠心肌炎症程度均有显著减轻,左心室收缩期内径显著缩小(P<0.05),心肌中ANP、BNP、TNF-α、IL-2、IFN-γ和TGF-β的表达水平显著降低(P<0.01),IL-4的表达水平显著升高(P<0.01).在H9c2细胞中,与LPS组比较,LPS+IL-1RII组和LPS+IL-1RII+IL-1RAcP组TGF-β和IL-6的表达水平显著降低(P<0.01),IL-10的表达水平显著升高(P<0.05);与LPS+IL-1RII组比较,LPS+IL-1RII+IL-1RAcP组TNF-α和IL-2的表达水平显著降低(P<0.05),IL-13的水平显著升高(P<0.01).Co-IP检测到IL-1RII与IL-1RAcP相互结合并形成了一个新的蛋白,为异源二聚体.结论:IL-1RII和IL-1RAcP重组质粒导入可有效缓解大鼠EAM的炎症损伤,其机制与两者结合形成异源二聚体并强力抑制炎症因子的表达有关.
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