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目的
观察与人类巨细胞病毒载体结合的转化生长因子β1(PCMV4-hTGF β1)重组质粒裸DNA直接注射于深Ⅱ度烫伤大鼠体内后的基因表达规律及对创面愈合的作用,探讨其作为核酸疫苗的可行性,为烧伤的基因治疗提供理论基础和实验依据。
方法大鼠随机分为烫伤+核酸疫苗组;单纯核酸疫苗组;对照组。采用ELISA方法检测裸DNA注射后血清中中和抗体水平;Southern杂交、原位杂交检测裸DNA注射后在肌肉中存留时间,组织特染法检测组织中Ⅰ/Ⅲ型胶原的变化。
结果裸DNA肌注7天后血清中可检测出抗TGFβ1中和抗体,21天达其峰值,28天有轻度下降。Southern杂交显示裸DNA注射后,5min即可检测出高浓度TGFβ1,1h后浓度开始下降,3h后仍可检测出。原位杂交在肌注5天后,肌肉中还有阳性反应。核酸疫苗组创面愈合速度在前9天较对照组快,差异有显著性意义(P<0.05),在后期与对照组间差异无显著性意义(P>0.05),但Ⅰ/Ⅲ型胶原比例明显下降(P<0.01)。
结论PCMV4-hTGF β1即可加速创面愈合,又可控制Ⅰ型胶原合成,控制瘢痕增生。证实了其作为核酸疫苗治疗烧伤创面及控制瘢痕形成是可行的。