【摘 要】
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目的 建立以α-突触核蛋白损伤为靶点筛选抗帕金森病创新药物的细胞模型。方法 通过PCR方法扩增目的基因,分子克隆技术构建原核表达载体。融合载体转化至大肠杆菌诱导后表达
【机 构】
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天然药物活性物质与功能国家重点实验室
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目的 建立以α-突触核蛋白损伤为靶点筛选抗帕金森病创新药物的细胞模型。方法 通过PCR方法扩增目的基因,分子克隆技术构建原核表达载体。融合载体转化至大肠杆菌诱导后表达重组α-突触核蛋白,亲和层析法纯化目的蛋白并通过蛋白免疫印迹和质谱技术进行鉴定,MTT法检测细胞存活率。结果 α-突触核蛋白基因的cDNA片段与理论分子量大小一致,并成功克隆至载体pET30a;测序正确的融合载体转化至大肠杆菌E.Coli.BL21（DE3）。转化子经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达α-突触核蛋白,通过改变温度
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